铽离子-镧系金属结合标签的荧光探针的改进.pdf

波 谱 学 杂 志 第 33 卷第 1 期 Vol. 33 No. 1 2016 年 03 月 Chinese Journal of Magnetic Resonance Mar. 2016 文章编号：1000-4556(2016)01-106-11 doi:10.11938/cjm 铽离子-镧系金属结合标签的 荧光探针的改进 1,2 1 1 陈少敏 ，唐 淳 ，龚 洲 [1. 波谱与原子分子物理国家重点实验室，武汉磁共振中心（中国科学院 武汉物理与数学研究所）， 湖北 武汉 430071 ； 2. 中国科学院大学，北京 100046] 摘 要：镧系金属因其具有较窄的发射光谱带，较大的斯托克斯位移以及毫秒级的荧光寿 命，而被广泛应用于荧光检测中，其中 Tb3+ 、Eu3+最为常用．镧系金属结合标签（Lanthanide Binding Tag ，LBT ）可以与蛋白质融合表达，并且一般不会影响蛋白的结构和功能，这些 特点使 LBT 被广泛应用于蛋白质结构与功能研究中．LBT 能够特异性地结合镧系金属离 子，并利用 LBT 上色氨酸的吲哚环作为“天线”吸收外部能量，再将能量传递给镧系金属 离子，进而激发镧系金属离子产生荧光．该文以经典模式蛋白泛素（Ubiquitin ，Ub ）作为 媒介，将 LBT 引入到 Ub 的碳端，采用定点突变的方法增加 LBT 上吲哚环的数量，观察 Ub-LBT [结合铽离子（Tb3+ ）]荧光量子产率的变化．结果表明在 LBT 结构中增加吲哚环的 数量能够提高 LBT （结合Tb3+ ）的荧光量子产率． 关键词：荧光光谱学；镧系金属结合标签（LBT ）；荧光量子产率；解离常数；泛素（Ub ） 中图分类号：O482.53 文献标识码：A 引言 [1] 镧系金属离子自发现以来，由于具有毫秒级别的荧光寿命 、荧光光谱具有200 nm 的斯托克斯位移以及荧光没有极性[2]等特点，被作为荧光探针在时间分辨的荧光检测、 收稿日期: 2015-04-13; 收修改稿日期: 2016-01-26 基金项目: 国家自然科学基金青年科学基金资助项目. 作者简介: 陈少敏(1989-)，女，新疆昌吉人，硕士研究生，研究方向为发展新型镧系金属探针用于蛋白质动态结构的 荧光能量共振转移研究. *通讯联系人：龚洲，电话：027 E-mail: gongzhou@wipm.ac.cn. 第 1 期 陈少敏等：铽离子-镧系金属结合标签的荧光探针的改进 107 荧光成像和荧光共振能量转移检测等方面广泛使用[3–6] ． 镧系金属结合标签（Lanthanide Binding Tag, LBT ）起源于钙调蛋白，钙调蛋白具 有 EF-hand 结构，能够特异性结合钙离子，而钙离子与镧系金属离子的原子半径很相似 [7]，因此镧系金属离子可以代替钙离子[8–10] ．对缺乏钙离子结合位点的蛋白，镧系金属 离子一般与在蛋白侧链引入的能特异性结合镧系金属离子的螯合剂[11,12]结合．1995 年， Szabo 和合作者发现钙调蛋白中有一段与钙离子结合的loop 区域表现出与铽离子（Tb3+ ） 较大的结合倾向[13] ．基于这段 loop 区域，他们经过一系列筛选和改进，设计了一段小 肽[14–16] ，提高了与镧系金属离子的结合能力．并在合适的位置引入色氨酸[17,18] ，这段 小肽定义为