技术咨询电话：400-607-9999 液体样品rna提取试剂 rnatrip ls .doc

液体样品RNA提取试剂 RNAtrip LS 货号：M090158 描述：RNAtrip LS是RNAtrip和TRIzol的增强版本，在有效提取固体组织和细胞RNA的同时，特别加强了对液体标本如全血、悬浮细胞、病毒样品等RNA的提取能力。用RNAtrip LS试剂提取液体标本RNA时，无需事先分离其中的细胞、细菌、病毒等病原微生物，直接将液体标本与RNAtrip LS试剂混合即可，这样就极大简化了样品的提取前处理过程。并且其提取能力强大，甚至可以从已经凝固的血液块中提取出高纯度的RNA。使用方法与RNAtrip LS和TRIzol相似，可在30－60分钟内完成。获得高纯度总RNA可用于RT-PCR、Northern Blot、RNA酶保护、Poly(A) mRNA纯化、体外翻译等实验。 血液RNA提取试剂具有与RNAtrip LS相似的特征，可以使用同一说明书。 储存：4 oC密封避光保存一年以上有效。 适用： (1) 液体标本(200 μl/ml): 全血、体液、尿液，悬浮细胞、病毒微生物样品等。 (2) 培养细胞 (5-10 x 106细胞/ml): 真核细胞，细菌，酵母。 (3) 固体组织 (50-100 mg/ml ): 人、动物、植物的各种新鲜或冻存组织。 操作准备： 极微量的RNA酶都会导致RNA降解。RNA酶污染主要来自以下五个方面：(1) 来自实验人员的双手。(2) 来自器皿、吸头离心管、自备液体。(3) 组织细胞破碎不可避免地释放内源RNA酶。(4) RNA未能完全与蛋白质分离。(5) RNA沉淀和溶解时来自吸头离心管和溶液。我们的Step by Step质量监测表明，RNAtrip LS试剂可100％抑制内源性和实验用品引入的外源RNA酶污染，并在随后的分离步骤极为有效地清除蛋白包括RNA酶。因此在有RNAtrip LS存在的情况下高压消毒30分钟的吸头离心管和溶液，可以胜任RNA提取操作。然而，一旦离开RNAtrip LS试剂的保护，如在沉淀和溶解步骤，来自吸头离心管和液体的RNA酶污染可能导致RNA降解。因此在这些步骤应严格使用高压消毒用品。戴手套无疑是有益的，但戴口罩和帽子则无必要。只要严格按照本指南进行准备和操作，使用RNAtrip LS试剂总是能获得完整的高纯度总RNA。这里描述的仅是针对RNAtrip LS试剂的实验准备方案，对其它来源RNA提取试剂未做全面检查。 固体组织破碎设备。准备下列装置之一，1)玻璃匀浆器。必要时泡酸清洁，用高压灭菌蒸馏水洗涤数次。2)研钵。适用于液氮冻存组织的研磨，清洗同玻璃匀浆器。3)组织细胞超声破碎仪器。探头插入装满蒸馏水的试管或烧杯中，开启超声清洗探头30秒至1分钟。4)高速机械匀浆器(Polytron，Tekmar或类似产品)。打开开关，在蒸馏水中清洗分散器头数次。对这些装置的部分部件高压消毒30分钟是保险的措施，但使用RNAtrip LS这种处理并不必要。 高压蒸汽30分钟消毒一次性吸头离心管。RNA沉淀和溶解之后，应严格使用高压消毒的一次性用品。然而RNAtrip LS能在RNA酶污染环境下工作，在裂解步骤可使用未高压但洁净的一次性吸头和离心管，但仅推荐在紧急情况下这样做。由于不可预测的原因，如动物已经处死，组织已取出，细胞已收取，而吸头和离心管尚未高压处理。这仅适用于RNAtrip LS试剂，对其它来源RNA提取试剂无效。此时保险做法是使用普利莱公司的组织RNA保护液(Cat# R1030)，把来不及处理的标本保存在RNA保护液中，25 oC保存2周，4 oC保存4周，－20 oC保存数月，标本中RNA不会降解。 DEPC处理的双蒸水。加DEPC到水中至终浓度为0.01% v/v，室温过夜，高压消毒30分钟。用于溶解RNA，配制TE缓冲液和75％乙醇。 普通双蒸水。高压消毒30分钟，用于冲洗器皿，配制琼脂糖凝胶和电泳用缓冲液。注意溶液配制后高压灭菌，但琼脂糖不能高压处理。 冰盒和湿冰。在冰上进行操作有助于减少RNA降解。 异丙醇，氯仿，纯乙醇，分析纯。75％乙醇用高压消毒的蒸馏水配制。 其它用品。电泳槽，双蒸水冲洗。离心机和加样器，无需处理。 戴手套。注意某些实验如提取质粒DNA使用大量RNA酶，为防污染须特别清洗实验器具和实验区域。 RNA提取程序 组织细胞破碎与裂解 冰上操作。立即并快速破碎组织至关重要。组织细胞过量不仅使RNA得率下降，还将导致DNA和蛋白质污染。在紧急情况下，如动物已处死，组织已取出，细胞已收取，异地取送标本，用户尚未做好实验准备时，推荐用户把组织细胞储存在RNA保护液(Cat# R1020)中，标本中的RNA不会降解。 (1) 液体标本：全血、体液、尿液，悬浮细胞、病毒微生物样品等。每200(l液体样品加1 ml RNA