萤光检测之脉冲激发仪控技术.pdf

光檢測之脈衝激發儀控技術 黃國政 張君勵 張中興 林明瑜 國家實驗研究院 國家實驗研究院 高雄醫學大學 國家實驗研究院 儀器科技研究中心 儀器科技研究中心 皮膚科 儀器科技研究中心 huangkc@itrc.org.tw hankchang@itrc.org.tw 970457@mail.kmuh.org.tw minyulin@itrc.org.tw 摘要 螢光反應通常被用偵測物體對某種藥物的生化作用或內含有某種染料等現象。一般螢光反應可使用 特定紫外光(200 －405 nm)照射在生物體或染料等待測物件上，該物件會因紫外光的激發，而放射出 特定頻率的光線 ，這些放射光線通常都由可見光或近紅外線(405 －900 nm)所組成，尤以265 nm 短 紫外光與 365 nm 長紫外光所激發出的黃光與紅光螢光最為普遍。但由於連續照射所激發之螢光無 法提供待測物件之周期反應資訊與清晰影像，且部 生物體的 光反應易受照射而衰減 ，故本研究 開發一套以可調脈衝紫外光(10 ms －1s/pulse)之儀控模組，以有機防偽染料 BL-ORT 進行脈衝紫外 光(365 nm 、375 nm 及405 nm)測試 ，並應用在protoporphyrin IX(PpIX)藥劑螢光檢測上。由實驗 可知 ，以30 ms/pulse 脈衝紫外光激發 BL-ORT 防偽染料，所取得的周期反應資訊最為完整 ，若使 用 405 nm 脈衝紫外光進行激發，所得到的放射強度可與連續激發相近，但光源耗電量只有一半。 使用特定頻率儀控模組所進行的脈衝 光反應不僅可得到完整螢光取像，亦可節省能源以達到儀器 可線上檢測與可攜帶化之目標。 關鍵字：螢光反應、脈衝紫外光、防偽染料、protoporphyrin IX 壹、 前言 由一個較短波長的光(UV光或藍光)照射具有螢光性質的物質 ，該物質的分子會吸收光的能量而被激 發至高能量狀態 ，並在微秒時間內回復低能量狀態 ，同時以較長波長的光(黃光或紅光)放射方式將多 餘能量釋出，此即為螢光反應。螢光反應的激發方式有光激發螢光(Photoluminescence ，PL)及雷射 激發螢光(Laser Induced Fluorescence ，LIF)兩種，而光激發光源可 為傳統光源激發螢光 (Conventional Lamp Induced Fluorescence ，CLIF)與LED光源激發螢光兩種。傳統光源激發螢光由 Jorgenson等人[1]在1981年時提出，其使用汞、 等電弧燈連續波長光源 ，以濾光片 離出所需的 波長，並聚焦激發物質分子而產生螢光 。由於使用濾光片來 離特定的波長，其激發光的強度大幅 降低 ，同時偵測極限靈敏度也隨之受限(1 －10 ppm) 。雷射激發螢光方式是以雷射為激發光源 ，由於 雷射具有高強度 ，單色及同調的特性 ，所以容易在單位面積上以透鏡聚焦強大能量 ，所以螢光反應 的靈敏度較高(0.001 －1 ppm) 。不管是傳統紫外激發光源 ，如高壓汞燈 、高壓氙燈及金屬鹵化物弧 光燈等，或是同調性高的雷射激發光源 ，其光源尺寸都非常大 ，且價格昂貴及壽命有限 。隨著 LED 技術的進步 ，紫外LED光源技術已發展成熟 ，如市售365 、375和405 nm紫外線波長LED等。由於 LED光源具有耗電量少、尺寸小，雜光少且光損小 ，以及有混光之彈性 ，目前已被大量應用醫療 、 防偽及生醫檢測上[2 －4] 。 當待測物質受到紫外線照射時 ，其特殊的化學鍵會被紫外線激發 ，所激化的能量轉成可見光釋出為 人眼所見。自然界有許多物質可產生螢光反應，如葉綠素 、甲殼素 、綠茶及常用於調味用的醬油 等，這些物質受到紫外線照射後都會有 光反應 ，這種 光反應是物質本身的特性 ，對人體完全無 害 。傳統紫外線光譜可 為三個波段：(1)長波紫外線(315 －400nm, UVA) ，常用於鈔票防偽偵測、 光催化劑空氣 化及醫療光線療法上，(2)中紫外線(280 －315 nm, UVB) ，用於醫療保健與植物生長 上，以及(3)短波紫外線(200 －280nm, UVC