重组海参溶菌酶C端基因（SjLys-C）的可溶性表达和抑菌活性分析.pdfVIP

j 黧一 Onlinesystem：http：／w／ww．jabiotech．org 农量生协技甫学攫 农 业 生 物 技 术 学 报 嘲■l-麓_ _ JournalofAgriculturalBiotechnology 2012，2O(4)：443—450 髦 DOI：10．3969／j．issn。1674—7968．2012．04．014 蠢 … 研究报告 LeRer 重组海参溶菌酶C端基因(SjLy~一C)的可溶性表达和抑菌活性分析 常艺海 丛丽娜 ‘卢冬 王红英 大连工业人学辽宁省发酵工程重点实验室，大连 116034 通讯作者，congln@dlpu．edu．ell 摘 要 为进一步研究海参(Stichop~ aponicus)溶菌酶基因(SjLys)(Genbank登录号：EF036468)中不同片 段表达产物的生物特性，本研究通过对其 eDNA片段的分析，发现 C端基因区域所对应的蛋白质序列中 含有非酶活性。根据已知的海参溶菌酶的eDNA序列，设计出含有NcoI和EcoRI酶切位点的特异性引 物，从新鲜的海参肠中提取总RNA，以其为模板利用 RT．PCR扩增出长度为 259bp的溶菌酶 C端 (SjLy~一c)基因。将该 目的基因连接到pET一32a(+)载体上，构建重组质粒pET．32a(+)一SjLy~一C，再转化至大肠 杆菌(Escherichiacoli)Rosetta(DE3)pLysS，成功地构建了重组蛋 白sjLys．C的基因工程菌。利用该工程菌 诱导发酵，结果显示它能高效表达出26kD左右的重组蛋 白sjLys．C。经过Westernblot分析，该重组蛋白 在 26kD左右能够与Penta—His抗体发生特异性免疫反应。对纯化的重组蛋 白sjLys．C进行了抑菌特性 的分析，结果发现它对溶壁微球菌(Micrococc~ odeikticus)~l副溶血弧菌(Vibrioparahaemolyticus)有较 高的抑菌活性 。此外，将该重组蛋白经 100℃、40min处理后，其抑菌能力提高了5％～21％。研究结果表 明，重组蛋 白SjLys．C基因工程菌能够制备出具有可溶性的、并具有抑菌活性的重组蛋 白SjLys—C，在农 业和医药等行业中有潜在应用和开发价值。 关键词 海参溶菌酶，重组蛋白SjLys．C，可溶性蛋白，分离纯化，生物活性 TheSolubleExpressionandAntibacterialActivityofCTerminusRegion LysozymeGene(SjLys—c)fromSeaCucumber(StichopusJaponicus) CHANGYi—Hai CONGLi-Na* LUDong WANGHong-Ying LiaoningKeylaboratoryofFermentationTechnology,DalianPolytechnicUniversity，Dalian116034，China Correspondingauthor，congln@dlpu．edu．cn Abstract In orderto characterizetheantibactefialactivity of geneproductsexpressedby severalgene rfagmentsfrom thegeneofStichopusjaponicuslysozyme (SjLys)，itseDNA (GenBankaccessionNo． EF036468)wasanalysedbybioinformatics．TheresultshowedthattheaminoacidregionofCterminusof SjLyscontainednon—enzym