羽衣甘蓝arc1 的抗体制备及蛋白表达分析 - 园艺学报.pdf

园艺学报，2017 ，44 (2) ：355 –363. Acta Horticulturae Sinica doi ：10.16420/j.issn.0513-353x.2016-0490；http ：//www. ahs. ac. cn 355 羽衣甘蓝 ARC1 的抗体制备及蛋白表达分析 1 2 1 1,* 李晓屿 ，王秋红 ，李玉花 ，蓝兴国 1 2 （东北林业大学生命科学学院，哈尔滨 150040 ； 黑龙江大学农作物研究院，哈尔滨 150080 ） 摘 要：ARC1 是芸薹属植物自交不亲和（Self-incompatibility，SI ）信号复合体下游传递因子，特异 性地介导 SI 信号传递。利用原核表达系统对羽衣甘蓝（Brassica oleracea var. acephala ）ARC1 的全长蛋 白（1 ~ 663 aa，BoARC1-F ）、UND 结构域蛋白（1 ~ 279 aa，BoARC1-N ）和ARM 结构域蛋白（361 ~ 663 aa，BoARC1-C ）进行重组表达。SDS结果显示这 3 种蛋白分别在分子量 68、33 和 38 kD 处特异 性地诱导表达。利用 Ni2+-NTA 树脂亲和层析技术获得重组蛋白。将 BoARC1-C 蛋白免疫小鼠并通过细胞 融合技术制备单克隆抗体，获得 2 株单克隆抗体。交叉反应试验结果显示制备的单克隆抗体具有 ARC1 识别特异性。通过免疫印迹技术检测 BoARC1 在不同组织和不同发育阶段柱头中的表达，结果显示 BoARC1 特异性地在羽衣甘蓝柱头中表达，而且在开花阶段的柱头表达量最高。 关键词：羽衣甘蓝；自交不亲和；ARC1 ；抗体制备；蛋白表达 中图分类号：S 681.9 文献标志码：A 文章编号：0513-353X （2017 ）02-0355-09 Preparation of Monoclonal Antibodies Against BoARC1 and Expression Analysis of BoARC1 in Ornamental Kale 1 2 1 1,* LI Xiaoyu ，WANG Qiuhong ，LI Yuhua ，and LAN Xingguo 1 2 （College of Life Sciences，Northeast Forestry University ，Harbin 150040，China ； Crop Academy of Heilongjiang University，Harbin 150080 ，China） Abstract ：Self-incompatibility is an effective way to avoid inbreeding depression and promote out-crossing in flowering plants. Armadillo Repeat Containing protein 1（ARC1 ），the downstream factor in SI pathway，can specifically mediated SI pathway. In Brassica oleracea var. acephala ，we constructed the full protein （1 –663 aa，BoARC1-F ），NUD domain （1 –279 aa，BoARC1