色谱与质谱联用技术在蛋白质翻译后修饰研究中的进展及应用 - 分析化学.pdf

第43卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 特约来稿 第10期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2015年10月 ChineseJournal of Analytical Chemistry 1479~1489 DOI:10.11895/j.issn.0253鄄3820.150485 色谱与质谱联用技术在蛋白质翻译后修饰研究中的进展及应用 1,2 1,2 1 1 1 *3 林 琳 摇 罗树生 摇 王灵珏摇 杨 杰摇 沈海南摇 田瑞军 1 2 3 (南方科技大学 化学系 ,分析测试中心 ,深圳市细胞微环境重点实验室 ,深圳518055) 摘摇 要摇 蛋白质翻译后修饰是调控各种细胞信号通路和细胞命运最为关键的分子机制之一。 在分子水平上, 蛋白质翻译后修饰的“写入冶、“擦除冶和“识别冶是实现其动态调控功能的核心过程,均属于生物分析化学的 研究范畴。 基于液相色谱与生物质谱联用的蛋白质组学技术经历了近十年的高速发展,已成为系统水平上表 征各种蛋白质翻译后修饰的标准方法。 本文综述了蛋白质翻译后修饰分析相关的关键技术和方法进展,主要 包括:各种翻译后修饰蛋白质和多肽的富集方法、基于高效液相色谱的多维分离方法和各种生物质谱鉴定方 法,并重点阐述了近年来的新的发展方向。 基于相关技术的快速发展和大规模鉴定数据的产生,本文重点介 绍了5种具有重要生物学功能的蛋白质翻译后修饰,包括:磷酸化、糖基化、泛素化、乙酰化和甲基化。 生物分 析化学领域的方法和技术创新必将进一步促进对蛋白质翻译后修饰的系统水平研究的发展。 关键词摇 蛋白质翻译后修饰;蛋白质组学;质谱;综述 1摇 引摇 言 蛋白质翻译后修饰是蛋白质水平发生的一种重要的生物化学过程,可为蛋白质的特定氨基酸位点 引入各种化学基团,例如磷酸根、糖基、甲基、乙酰基和泛素链等。 在哺乳动物表达的所有蛋白质中,超 过50%的蛋白质可以在特定时间和亚细胞空间发生各种各样的翻译后修饰,并且调控着许多重要的生 [1] 物学功能 。 目前,已陆续发现近300种蛋白质翻译后修饰,其中很多重要的翻译后修饰都是以可逆方 [2] 式被相关酶调控的 。 这些可逆的蛋白质翻译后修饰是动态调控蛋白质功能的重要方式,同时也为生 物体系提供了更高层次的复杂度。 以具有重要生物学功能以及研究最为广泛的蛋白质磷酸化为例,使 底物蛋白质发生磷酸化修饰的酶是激酶,而使磷酸化蛋白质发生去磷酸化的酶是磷酸酶。 在人类基因 组中,分别有518种激酶和约137种磷酸酶。 激酶和磷酸酶常有多种底物蛋白质,而每种底物蛋白质往 往有多个磷酸化位点。 这些被磷酸化的氨基酸序列常会特异性地被蛋白结构域所识别(例如 SH2、 [3,4] PTB、BRCT结构域等),从而形成基于磷酸化的蛋白质间相互作用 。 如图1A所示,正是由于细胞内 存在着数目庞大的可以“写入冶、“擦除冶和“识别冶磷酸化位点的蛋白质,形成了一个极为复杂的由磷酸 化介导的信号转导网络。 从分子水平上,上述细胞内的生物化学过程主要涉及各种修饰基团的“写入冶 和“擦除冶,以及蛋白质间基于特定修饰基团的“识别冶。 这类分子机理正是生物分析化学研究的核心生 物学问题之一。 传统的蛋白质翻译后修饰研究主要依赖于基于特异性抗体的免疫检测技术或放射性标记技术。 这 些方法对研究由单一位点翻译后修饰介导的细胞信号转导过程起着不可替代的作用。 然而,由于上述 技术存在操作要求高、特异性抗体制备周期长等缺点,很难实现蛋白质翻译后修饰的大规模检测。 近年 来,基于液相色谱与生物质谱联用技术(LC鄄MS)的蛋白质组学策略发展迅速,为系统水平上的蛋白质翻