用壳聚糖亲和磁性微球纯化血浆凝血酶的研究 - 生物化学与生物物理进展.pdf

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2010, 37(4): 433~440 壳聚糖亲和磁性微球纯化血浆凝血酶的研究 1, 2) 2) 1) 2)* 李梅基 李昭华 胡建成 董先智 1) 2) ( 兰州大学生命科学学院，兰州730000 ； 中国科学院生物物理研究所，北京100101) 摘要 通过化学共沉淀法合成纳米粒子Fe O 磁核，以壳聚糖为包裹材料包被自制的磁核，采用乳化交联法制备了具有核- 3 4 壳结构的磁性高分子微球- 壳聚糖磁性微球，并偶联肝素配基得到了一种新型亲和磁性微球，应用SEM 、FT-IR、XRD 等对 微球的粒径、形貌、结构和磁响应性进行了表征 考察了该亲和磁性微球对凝血酶的分离 化性能，并与传统的DEAE 离子 交换色谱法进行了比较 结果表明，所得亲和磁性微球具有较窄的粒径分布、形状规整，粒径在50 nm 左右 对凝血酶一步 吸附 化获得了比活为 1879.71 U/mg 的酶，得率85% ， 化倍数 11.057，而传统柱层析法得率为72% ， 化倍数仅为 5.33 制备了壳聚糖亲和磁性微球，并将磁分离技术应用于凝血酶的分离 化，得到了较好的效果，这将对于凝血酶的 化 及生产具有一定参考价值 关键词 亲和磁性微球，壳聚糖，凝血酶，磁分离， 化 学科分类号 Q658 DOI: 10.3724/SP.J.1206.2009.00587 凝血酶(EC)是一种专一性很强的丝氨 素亲和层析三种方法 在上述方法中，获得产品 酸蛋白水解酶，在调节血小板凝集和血液凝固的止 度最好的方法是亲和层析法，在层析柱中使用亲和 血剂中发挥多功能作用[1-2] 它能水解血纤维蛋白 性填料如肝素化的葡聚糖等，利用亲和吸附分离制 原的4 个Arg-Gly 肽键，产生不溶性的血纤维蛋 备凝血酶 然而亲和柱层析法的一个局限是对上样 白，使血液变成凝胶而发生凝固 专一的酶切位点 液体的质量要求较高，前期粗分离得到的样品液中 使得凝血酶在基 工程中也得到了广泛应用，将凝 常常含有悬浮微粒和各类杂质，如不予以预 化， [3-4] 血酶酶切识别序列作为融合蛋白接合位点 进行 会出现淤堵、层析效率低下等问题并影响产品的质 基 工程蛋白质产品后续加工处理 在临床上，凝 量 此外，采用亲和层析法分离凝血酶比较耗时， [5] 血酶广泛适用于局部止血 ，可用于手术中不易结 还会产出大体积的蛋白质稀溶液，对生产制备都有 扎的小血管止血、消化道出血以及外伤出血等 目 较大影响 目前，国内外还尚未见到运用亲和磁分 前，医用和试剂用凝血酶的生产主要依靠从天然产 离技术快速 化凝血酶的报道 物如动物血浆中分离 化 从血浆中分离 化凝血 磁性高分子微球是将磁性粒子分散、包裹于高 酶主要包括凝血酶原的提取、凝血酶原的激活和凝 分子材料中或者包覆在高分子材料表面形成的具有 [6] 血酶 化几个步骤 国内外凝血酶 化的方法有很 特殊功能团的微球 ，是近些年发展起来的一种新 多种，传统的物理化学方法即丙酮沉淀法和硫酸铵 型功能高分子材料 它除具有高分子微粒的特性， 分级盐析法，这两种方法操作简便、成本低，但得 如可通过共聚、表面改性等化学反应在微球表面引 到的凝血酶制品 度不高、回收率低，应用上受到 入多种反应性功能基(如—OH、—COOH、—CHO、 一定限制 与传统的物理化学方法相比，采用层析 —NH2 等) ，也可通过共价键来结合酶