分光光度计法测定磷脂酶a1酶活条件优化 - 重庆理工大学学报.pdf

第２７卷　第３期 重 庆 理 工 大 学 学报（自然科学） ２０１３年３月 Ｖｏｌ．２７　　Ｎｏ．３ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｏｎｇｑｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙｏｆＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮａｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ） Ｍａｒ．２０１３  ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７４－８４２５（ｚ）．２０１３．０３．００５ 分光光度计法测定磷脂酶Ａ１酶活条件优化 苏燕南，薛正莲，马琦亚，王　洲，赵世光 （安徽工程大学 生物与化学工程学院，安徽 芜湖　２４１０００） 摘　　　要：优化了分光光度计法测定ＬｅｃｉｔａｓｅＵｌｔｒａ的磷脂酶Ａ１活力的相关参数。根据单因 素实验结果选择底物浓度、酶稀释倍数、ｐＨ值３个因素进行正交实验，经分析得到酶活测定的 最佳条件为：酶稀释倍数为１２５０倍，缓冲体系ｐＨ值为６．５，离子强度为５０ｍＭ，底物浓度为 ６％，终止酶反应方式为加入０．４ＭＴＣＡ溶液。优化后酶活最高值为４８７６．９Ｕ／ｍＬ，较原工艺提 高了１８．４２％。 关　键　词：磷脂酶Ａ１；ＬｅｃｉｔａｓｅＵｌｔｒａ；分光光度计法；正交实验 ＋ 中图分类号：ＴＳ２０１．２５　　　文献标识码：Ａ 文章编号：１６７４－８４２５（２０１３）０３－００２２－０６ ＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｏｆＣｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃＭｅｔｈｏｄｆｏｒＰｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅ Ａ１ＡｃｔｉｖｉｔｙＡｓｓａｙ ＳＵＹａｎｎａｎ，ＸＵＥＺｈｅｎｇｌｉａｎ，ＭＡＱｉｙａ，ＷＡＮＧＺｈｏｕ，ＺＨＡＯＳｈｉｇｕａｎｇ （ＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＢｉｏｌｏｇｉｃ＆ＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＡｎｈｕｉＰｏｌｙｔｅｃｈｎｉｃＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈｕ２４１０００，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｒｅｌｅｖａｎｔｐａｒａｍｅｔｅｒｓｏｆｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄｆｏｒｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ１ａｃｔｉｖｉｔｙａｓｓａｙｗａｓｏｐ ｔｉｍｉｚｅｄ．Ｔｈｒｅｅｆａｃｔｏｒｓ，ｓｕｂｓｔｒａｔｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｅｎｚｙｍｅｄｉｌｕｔｉｏｎｆａｃｔｏｒａｎｄｐＨ，ｗｅｒｅｃｈｏｓｅｆｏｒｏｒｔｈｏｇ ｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔｂａｓｅｄｏｎｓｉｎｇｌｅｆａｃｔｏｒｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ．Ｔｈｅｏｐｔｉｍａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓｆｏｒｅｎｚｙｍｅａｓｓａｙｗｅｒｅａｓ ｆｏｌｌｏｗｓ：ｅｎｚｙｍｅｓｏｌｕｔｉｏｎｄｉｌｕｔｅｄｆｏｒ１２５０ｆｏｌｄ，ｐＨ６．５，ｉｏｎｉｃｓｔｒｅｎｇｔｈｏｆ５０ｍＭ，ｓｕｂｓｔｒａｔｅｃｏｎｃｅｎ ｔｒａｔｉｏｎｏｆ６％，ａｄｄｉｎｇ０．４ＭＴＣＡｆｏｒｅｎｚｙｍｅｒｅａｃｔｉｏｎｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ．Ｔｈｅａｃｔｉｖｉｔｙｒｅａｃｈｅｄａｍａｘｉｍｕｍ ｖａｌｕｅｏｆ４８７６．９Ｕ／ｍＬ，ｗｈｉｃｈｗａｓｉｎｃｒｅａｓｅｄ１８．４２％ ｃｏｍｐａｒｅｄｔｏｔｈｅｏｒｉｇｉｎａｌｐｒｏｃｅｓｓ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ｐｈｏｓｐｈｏｌｉｐａｓｅＡ１；ＬｅｃｉｔａｓｅＵｌｔｒａ；ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃｍｅｔｈｏｄ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ ［２］ 　　磷脂酶 Ａ１是一类专一性水解卵磷脂 ｓｎ－１ 率高，是一种绿色环保高效的脱胶方法 。目前， ［１］ 位酰基的酶类，属于脂肪酶的一种 。磷脂酶Ａ１ 用于油脂脱胶的磷脂酶Ａ１为诺维信公司生产的 ［３］ 可用于植物油脱胶。相对于传统的物理和化学脱 ＬｅｃｉｔａｓｅＵｌｔｒａ（Ｅ．Ｃ．３．１．１．３） 。磷脂酶 Ａ１酶