牛奶中部分成分的分析.doc

牛奶中部分成分的分析 钙、铁锌牛钙 铁 锌钙、铁锌、原理 牛乳中的主要的蛋白质是酪蛋白，含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物，等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理，将牛乳的pH调至4.7时，酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物，除去脂类杂质后便可得到纯酪蛋白。 双缩脲(NH2CONHCONH2)在碱性溶液中与硫酸铜反应生成紫红色化合物，称为双缩脲反应，蛋白质分子中含有许多肽键在碱性溶液中也能与Cu2+反应产生紫红色化合物。在一定范围内，其颜色的深浅与蛋白质浓度成正比。因此，可以利用比色法测定蛋白质浓度。双缩脲法是测定蛋白质浓度的常用方法之一。操作简便、迅速、受蛋白质种类性质的影响较小，但灵敏度较差，而且特异性不高。除-CONH-有此反应外，-CONH2、-CH2NH2、-CS-NH2等基团也有此反应。 钙与身体健康息息相关，钙除成骨以支撑身体外，还参与人体的代谢活动，它是细胞的主要阳离子，还是人体最活跃的元素之一，缺钙可导致儿童佝偻病，青少年发育迟缓，孕妇高血压，老年人的骨质疏松症。缺钙还可引起神经病，糖尿病，外伤流血不止等多种过敏性疾病。补钙越来越被人们所重视。牛奶中含有易被人体吸收得钙，有些牛奶产品中还特地加钙而成为钙奶。对于液体牛奶中钙的含量，可采用EDTA法进行直接测定。考虑到牛奶中含有Fe3+、Al3+等干扰离子，可以加入少量三乙醇胺以消除它们的，调节pH≈12～13，以铬蓝黑R作指示剂，指示剂与钙生成红色的络合物，当用EDTA滴定至计量点时，游离出指示剂，溶液呈现蓝色。 当一束光通过一个吸光物质（通常为溶液）时，溶质吸收了光能，光的强度减弱。吸光度就是用来衡量光被吸收程度的一个物理量。 　　吸光度用A表示。 　　A＝abc，其中a为吸光系数，单位L/(g·cm),b为液层厚度（通常为比色皿的厚度），单位cm ， c为溶液浓度，单位g/L 　　影响吸光度的因数是b和c。a是与溶质有关的一个常量。此外，温度通过影响c，而影响A。 　　符号A，表示物质对光的吸收程度。邻二氮菲也叫邻菲啰啉，是测定微量Fe2+的高灵敏度显色剂在pH 2～9的条件下，Fe2+与邻二氮菲生成稳定的橙红色络合物，在510nm波长处有最大吸收。 该配合物的 lgk稳 ＝ 21.3（20 ℃），摩尔吸光系数 510 =1.1×104L?mol-1?cm-1 。 在显色前，首先用盐酸羟胺把 Fe3+ 离子还原为 Fe2+，其反应式如下： 2Fe3++2NH2OH·HCl ＝ 2Fe2++4H+ +2Cl- +N2↑ +2H2O 测定时，控制溶液的酸度在 pH＝5 左右较为适宜。酸度高时，反应进行较慢；酸度太低，则 Fe2+离子水解，影响显色。当铁浓度在5.0 mg／mL以内时，吸光度与Fe2+浓度呈直线关系。Bi3+Cd3+、Hg9+、Ag+、Zn2+等离子在 pH ＝ 2~9 时与邻二氮菲生成沉淀。 Co2+， Ni2+， Cu2+等离子可与邻二氮菲形成有色配合物，故应注意它们的干扰。 锌是人体中必需的微量元素之一，锌缺乏会阻碍生长发育，过量又会导致胃癌等疾病。人类从牛奶等饮食中可以获得一定量的锌。在pH4.0～5.5的水溶液中，锌离子与双硫腙C13H12N4S）生成红色螯合物，摩尔吸光系数 5 =9.3×104L?mol-1?cm-1用四氯化碳萃取后比色定量。在选定的pH条件下，用足够量的硫代硫酸钠可掩蔽水中存在的少量铅、铜、镉、钴、铋、镍、金、钯、银、亚锡等干扰金属离子。 3、实验步骤 3.1、试剂的配制 3.11、pH4.7醋酸-醋酸钠缓冲液先配A液与B液。A液：0.2mol/L醋酸钠溶液。B液：0.2mol/L醋酸溶液。 取醋酸钠，mL加水稀释至100ml，混合即得pH4.7的醋酸——醋酸钠缓冲液mL。乙醇—乙醚混合液双缩脲试剂：称取CuS04·5H2O g，酒石酸钾 g和碘化钾g，分别溶解后混匀，加6 mol·L-1NaOH mL，最后加水至100mL，贮于棕色瓶中，避光，可长期保存。蛋白质标准液(10mg·mL-1)，用小烧杯称取干燥的牛血清蛋白100.0mg，以少量生理盐水溶解后倒入l0mL容量瓶中，淋洗小烧杯数次，一并倒入容量瓶中，最后加生理盐水至刻度线。待测蛋白样本：将牛奶样品用生理盐水准确配制成一定浓度的溶液后再测定；将制得的酪蛋白用生理盐水准确配制成一定浓度的溶液后再测定。（如若不能溶解，滴加几滴6mol/L NaOH溶液、分别用l0mL容量瓶定容）铁标准溶液(40.0μg·mL-1)：:准确称取0.345g硫酸铁铵〔 NH4 Fe (SO4)2·12H2O〕于烧杯加入6mL6 mol·L-1 HCl 和少量水，溶解后用纯水定容至10mL。此溶液1.00mL含有40.0μg铁。盐酸羟胺溶液(10