禽流感病毒H5N1亚型血凝素基因在昆虫细胞中的表达.pdfVIP

安徽农业科学。JournalofAnhuiA ．Sci．2008。36I32)：13988—13990 责任编辑 孙红忠 责任校对．吴晓燕 禽流感病毒 I-I$N1亚型血凝素基因在昆虫细胞中的表达 王桂军，邵红霞，金文杰，秦爱建 (江苏省动物预防医学重点实验室，扬州大学，江苏扬州225oo9) 摘要 [目的]研究禽流感病毒HSN1亚型血凝素基因在昆虫细胞中的表达。[方法]将禽流感病毒HSN1亚型 基因以BamHI和 NotI双酶切插入pFastBael载体构建pFast．H5HA转移栽体质粒，然后将pFast-HSHA转入含有穿梭质粒的感受态DH】0Bac中发生转座 作用。在含有x．gal、IVrG、庆大霉素、卡那霉素和四环素的琼脂平板上筛选白色茵落，通过连续传代4次后获得稳定的重组质粒reBac- mid．H5HA。[结果]将重组质粒reBacmid．H5HA转染sl9昆虫细胞，获得含有禽流感病毒H5N1亚型 基因的重组杆状病毒，经间接 免疫荧光和Western．blot证实HA基因在 昆虫细胞中获得表达。重组杆状病毒表达产物能够凝集鸡红细胞，并能被抗H5N1HA单抗所 抑制。[结论]重组血凝素蛋白在杆状病毒中能获得正确表达，为研制AIVI-I5亚型检测抗原和亚单位疫苗奠定基础。 关键词 禽流感病毒；I-I5Nl；血凝素基因；重组杆状病毒 中图分类号 $858．2 文献标识码 A 文章编号 o5l7—66l1(2008)32—13988一o3 ExpressionofHemagghtininGeneofAvianInfluenzaVirusSubtypelI5N1inInsectCells WANGGui-junetal (KeyLabofVeterinaryMedicineofJiangsuProvence，YangzhouUniversity，Yangzhou，Jiangsu2250o9) Abstract [Objective] estudyaimedtostudytheexpressionofHemagglutinin(HA)geneofavianinfluenzaviressubtypeH5Nlininsect cells． 『Method1TheHAgeneofavianinfluenzavirussubytpe I-I5N1wascleavedwithBamHIand IfromplasmidpcH5HAandinserted intobaculovirustransfervectorpFastBaelforconstructingtherecombinanttransfervectorpFast—I-ISHA．ThepFast-H5HAwastransofrmated intoE．c DH10Baccellswithshutlieplasmidbytransposition．ThewhitecolonieswerescreenedonhteagarplatewithX-gal，IPrG，genta· micin．kanamycinandtetracyclineandthenhtestablerecombinantplasmidwas constructedasreBaemid—H5HAthroughcontinuouspassageofr 4times．fResult1TherecombinantbaelovimswithHAgeneofavianinfluenzaviressubtype H5N1wasobatinedbytransfeetingsi9cellswith therecombinantplasmidreBaemid．H5HA．TheresultsofIFAandWestem．blotassaydemonstratedthatHAproteinwasexpressedinthest9in- sectcellsinfectedwithrecombinantbaculoviresandcouldagglutinatechickenredbloodcells。whichcouldbeinhibitedbyhtemonoclonMan- tibodyagainstH5NlHA．[Conclusion]TherecombinantHAproteincouldgetthefightexpressioninbaeulovims，whichgiveagoodbasefor replacementsofAIV indevelopingdetectionn