同工酶技术在瓜类育种中应用.docVIP

同工酶技术在瓜类育种中应用同工酶普遍存在于高等植物中,主要指那些来源相同、催化性质相同而分子结构有差异的酶蛋白分子。迄今为止,在蔬菜上已研究过的同工酶有:过氧化物酶(POD)、酯酶(EST)、苹果酸脱氢酶(MDH)、酸性磷酸酶(APS)、磷酸酯酶、α-淀粉酶、胞外漆酶(ECI)、超氧化物歧化酶(SOD)、儿茶酚酶(Cat )、醇脱氢酶(ADH)等[1]。同工酶作为植物界存在的一种普遍现象受到了广泛的研究,并且应用于植物遗传育种、植物起源与分类、杂种优势预测及检定抗病品种和生物进化等方面。目前,关于研究同工酶的文献很多,本文旨在着重探讨同工酶在瓜类育种中的应用。 1利用同工酶鉴定瓜类种子纯度 纯度是种子最重要的质量指标,是评定种子等级的主要依据,是种子检验的重点项目和最大难点。随着科学技术的发展,常规的瓜类种子纯度鉴定方法大都是结瓜后以瓜形来估算,但是由于生育期较长,这种方法花费的时间较长,有很大的局限性,尤其对杂交种子及其母本种子几乎无法进行分辨。从20世纪70 年代,人们开始探索利用电泳技术通过同工酶分析品种纯度。因为杂交种子的同工酶谱带包含有双亲的谱带和等位基因间的杂交种带,利用这一特点就可以判别瓜类杂交种子的纯度。纪颖彪等[2]利用苹果酸脱氢酶(MDH)同工酶来检测黄瓜F1代的纯度,同工酶检测和田间形态检测非常接近,两者相关系数达0.95。但曹宛红等[3]用同工酶及可溶性蛋白分析了西瓜品种及种间差异,认为同工酶只适用于某些野生品种和栽培品种间的鉴定,却不能用于像京欣1号这样父母亲缘关系很近的杂交种的纯度鉴定。 2利用同工酶研究瓜类亲缘关系及分类 应当指出,所有的同工酶分析均表明,亲缘关系越远,酶谱差异越大,亲缘关系越近,酶谱越相似。由于在蔬菜育种中,了解种质资源的遗传基础,可以提高对种质资源的有效利用,因此,同工酶分析将对蔬菜种质资源的开发、利用起到促进作用。 目前,同工酶技术已有人在黄瓜的分类鉴别、亲缘起源关系的探讨和遗传分析等[4-6] 方面应用过。漆小泉等[7]通过对南瓜过氧化物酶和酯酶同工酶进行分析,认为印度南瓜、美洲南瓜与中国南瓜的亲缘关系较近,而印度南瓜与美洲南瓜之间的亲缘关系较远。这与利用细胞学研究的结论相吻合。仇志军等[8]对32个国内外西瓜品种的亲缘关系进行了同工酶分析:亲缘关系越远,酶带差异越大,野生品种由于基因库丰富,酶带数目多于栽培品种。还将有代表性的28个品种分为8类,与实际的品种亲缘关系相符。以上的同工酶分析均表明:亲缘关系越远,酶谱差异越大;亲缘关系越近,酶谱越相似。从分子水平揭示了瓜类种质资源的遗传基础,为有效的利用瓜类种质资源,改良瓜类品种提供了依据和方法。 3利用同工酶预测杂种优势 Schwartz是最早利用同工酶预测杂种优势的,李继耕、杨太兴等[9]认为杂种优势与同工酶酶谱类型有关:具有杂种酶谱或互补酶谱的组合常属强优势组合;具单一亲本酶谱的组合,不同作物优势表现不同;而无差异型酶谱的组合,一般为无优势或弱优势组合。张兴平等[10]报道了西瓜杂种POD同工酶表现“偏父型”酶谱的大多在产量和抗性方面表现较强的杂种优势,杂种缺少双亲某些酶带的均表现为杂种负势或优势不明显。王亚复[11]也讨论过甜瓜杂种优势与同工酶的关系。但由于取样的时期、部位和方法都影响试验的准确性,所以同工酶不能作为预测杂种优势的唯一指标。刘永胜报道[12]西瓜(Citrullusl natus)的两个同工酶位点POD(过氧化物酶)和EST(酯酶)与杂种优势有密切的关系,具有超亲优势的F1植株的POD酶带与父本相同,EST酶带与母本相同。 4利用同工酶鉴定瓜类抗病性 当病原菌侵入植物后会使植物组织代谢发生变化,引起植物体内多种同工酶的变化。所以感病品种与抗病品种在同工酶上存在差异,可以利用这种差异作为植物病害诊断和抗病品种筛选的手段之一。王瑜[13]报道了利用接种病原菌后黄瓜体内过氧化物酶活性提高幅度以及过氧化物酶同工酶变异筛选不同抗枯萎病的品种和植株。顾卫红等[14]探讨了同工酶系统( POD、COT、CYT)与甜瓜枯萎病的关系。张兴平等[15]对薄皮甜瓜和厚皮甜瓜功能叶片POD和CAT同工酶的分析表明,植株感染病毒后,POD和CAT酶分子数目明显增多,还出现了新的谱带;尤其是CAT同工酶,病株出现了健株中未曾发现的CAT2谱带。可以认为POD和CAT同工酶可作为衡量甜瓜抗病毒的一个生化指标。赵尊练报道[16],对西瓜炭疽病抗病力强的品种,其叶片和根系中拥有比感病品种更为丰富的分子量较大的POD同工酶。 5利用同工酶鉴定瓜类抗低温性 刘鸿先[17]研究了低温对不同耐寒力黄瓜幼苗子叶各细胞器中SOD同工酶的影响,发现同工酶易受外界条件影响而变化,说明