虎刺梅提取物对大葱紫斑病原孢子及菌丝影响.docVIP

虎刺梅提取物对大葱紫斑病原孢子及菌丝影响摘要：在25 ℃培养箱条件下，通过测定大葱紫斑病原菌的孢子萌发率和病原菌丝生长抑制率，研究了虎刺梅提取物对大葱紫斑病原菌的抑菌活性。试验结果显示，虎刺梅提取物浓度为100 mg/mL、50 mg/mL时，大葱紫斑病原孢子萌发率低于50%，菌丝生长抑制率大于60%。表明虎刺梅提取物对大葱紫斑病原菌具有较强的抑制作用。 关键词：虎刺梅提取物；大葱紫斑病原菌；萌发率；抑制率 大葱紫斑病又称黑斑病，是由葱格孢菌引起的真菌性病害，主要为害大葱的叶和花梗。近年来，随着大葱生产的发展，大葱紫斑病的发生与为害逐年增加，在河北省及其他省份均有不同程度发生，严重时影响大葱生长和产量，造成一定的经济损失。因此，有效防治大葱紫斑病对提高产量和效益十分重要。 植物是生物活性化合物的巨大天然宝库，其产生的次生代谢产物超过40多万种，近年来，开发植物次生代谢产物用于杀虫、抑菌具有广泛的应用前景。虎刺梅是大戟科大戟属藤本多刺落叶植物。全世界大戟属植物有2 000余种，中国产200余种，其中光棍树、一品红、变叶木、霸王鞭，药用植物中的大戟、泽漆、甘遂、狼毒、续随子等都与虎刺梅同属[1]。大戟属植物的共同特点是，树体汁液含有特殊结构的二萜类化合物。笔者利用超声波辅助提取法提取虎刺梅植物提取物，并对提取物进行了大葱紫斑病原菌抑菌活性试验，以期寻找新的具有抗菌、抑菌活性的植物源农药。 1 材料和方法 1.1 材料 供试植物为虎刺梅，购于衡水花卉市场。 供试大葱紫斑病原菌采自衡水卢家村大葱菜地。 1.2 方法 1.2.1 虎刺梅植物提取物的制备 虎刺梅烘干粉碎→提取（虎刺梅∶70%乙醇＝1∶5，m/V）→超声波（25 min）→离心（3 500 r/min，20 min）取上清液→40 ℃旋转蒸发→用70%乙醇定容到50 mL（含虎刺梅干粉末50 g）→编号→4 ℃冰箱保存备用[2-3]。 1.2.2试验设计 试验设5个处理：在无菌条件下，将待测提取液原液用70%乙醇稀释成所需浓度100 mg/mL、50 mg/mL、10 mg/mL，分别取不同浓度提取液的稀释液1 mL加入100 mL的PDA培养基中，摇匀后趁热倒入直径90 mm的培养皿内，即处理1、处理2、处理3。取70%乙醇1 mL加入100 mL的PDA培养基中，制平板，即处理4。处理5为空白对照，不加入任何抑菌物质的PDA培养基。 1.2.3 提取物对孢子萌发率的影响 大葱紫斑病原菌经培养后在菌落表面产生分生孢子，用毛笔将分生孢子刷于盛有灭菌水的烧杯中，将其配成在10×10倍显微镜下每视野约30～35个分生孢子的悬浮液。用接种环取孢子悬浮液均匀地涂在不同处理PDA培养基载玻片上，保湿，置于25 ℃光照培养箱培养，6 h后，用1 g/L的HgCl2固定，检查孢子萌发情况，每个处理观察10个视野约300个孢子。孢子萌发以芽管长度超过孢子直径长度（指直径小的一边）的1/2为标准。孢子萌发率计算公式如下。 1.2.4 PDA平板法测定提取物的抑菌活性 预先培养大葱紫斑病原菌，待平板凝固后接入生长一致的菌饼（d=6 mm），菌丝面向下，每皿接种1个菌饼，每个处理重复3次，25 ℃光照培养箱培养6 d后观察结果。用十字交叉法测量供试真菌菌落生长直径，用下述公式计算抑菌率。 2 结果与分析 2.1 提取物对病原孢子萌发率的影响 从表1可知，不同浓度虎刺梅提取物对大葱紫斑病原孢子萌发率有抑制作用。100 mg/mL、50 mg/mL浓度下，病原孢子萌发率均低于50%；而浓度为10 mg/mL时，孢子萌发率接近60%，说明该提取物具有很好的抑制作用，且不同浓度之间差异比较明显，从而明确了提取物的最佳抑菌浓度为100 mg/mL。 2.2 提取物对病原菌丝生长的影响 由表2可知，在供试条件下，不同浓度虎刺梅提取物对大葱紫斑病菌均有一定的抑制作用。在100 mg/mL、50 mg/mL的浓度下，排除乙醇的干扰（相加或相减作用）影响，抑制率大于70%。而10 mg/mL虎刺梅提取物的抑制作用不明显，说明虎刺梅提取物在100 mg/mL、50 mg/mL较高浓度下具有较高的活性。 3 结论与讨论 利用超声波辅助提取法提取虎刺梅植物提取物，并对提取物进行了农用抑菌活性试验。结果表明，不同浓度的虎刺梅提取物对大葱紫斑病菌均有一定抑制活性，在100 mg/mL、50 mg/mL浓度下，大葱紫斑病原孢子的萌发率低于50%，菌丝生长抑制率大于70%。说明该提取物具有很好的抑菌作用，且不同浓度之间的抑制作用差异比较明显，从而明确了提取物的最佳抑菌浓度为