便于N-糖分析的单次用和高通量HILIC SPE及IgG对照标准品 - Waters.PDF

[ 技术简报 ] N- HILIC SPEIgG Matthew A. Lauber, Stephan M. Koza, 和 Kenneth J. Fountain 目的 GlycoWorks可帮助制备出N-糖用于后续分析，并 展示GlycoWorks™工作流程的各方面优 为方法确认和故障排除提供不同的SPE型式(低/ 势，包括在方法验证和故障排除中适 用于不同SPE型式的灵活性以及所采 高通量)以及IgG对照标准品。 用的人IgG对照标准品的可行性。 以下内容展示了GlycoWorks工作流程的两个突出方面：适用于不同的 背景 SPE型式(单次用小柱和高通量板)，以及可用于方法确认和故障排除 蛋白质的糖基化反应是十分有意义的翻 的人IgG对照标准品。 译后修饰，可以调节蛋白质的结构和功 能。生物治疗药物的糖基化作用无疑是 变性 必须进行彻底表征与监测的结构特征， 糖蛋白 还原 采用PNGase F 释放的N-多聚糖 进行去糖基化 +蛋白质 烷基化 尤其是在多聚糖图谱的变化与疗效和/或 免疫原性的变化相关时。 HILIC SP E GlycoWorks™ GlycoWorks 试剂盒* GlycoWorks 一套用于评价糖蛋白中N-糖的常规应用 对照标准品 (Rap iGest™ SF, HILIC µElution 提取板 IAM和 DTT) 或1 mL小柱 方法包括：通过PNGase F释放出多聚糖， 经过纯化、 , HILIC 使用2-AB 经过纯化、 采用具有荧光活性的2-氨基苯甲酰胺 带有标记的多聚糖 SPE 进行还原胺化 未标记的多聚糖 (2-AB)进行标记，然后采用亲水作用色谱 分析(例如， 法(HILIC)进行分离，最后由荧光检测器 HILIC-FLR) (FLR)进行检测(图1)。此工作流程中，比 GlycoWorks 试剂盒* (氰基硼氢化钠， 较复杂的是样品制备步骤。为使此过程 乙酸和DMSO) ) * PNGase F和2-AB不包含在试剂盒内 更加直观，沃特世(Waters®)推出了 图1. 采用GlycoWorks试剂盒从糖蛋白中制备出2-AB标记的多聚