化痰散结方对人乳腺癌耐药细胞的影响和机制.pdfVIP

提 要 目的： 通过研究化痰散结方对人乳腺癌耐药细胞株 MCF-7/ADR 耐药相关蛋白和凋亡抑 制基因表达的影响，阐发其逆转多药耐药的作用机理，为中医治疗乳腺癌化疗中普遍 存在的耐药相关问题提供理论和实验依据。 方法： 1.化痰散结方对MCF-7/ADR细胞多药耐药相关蛋白及基因的研究 1)MTT 法检测化痰散结方对MCF-7/ADR细胞系的耐药逆转作用，计算耐药逆转倍 数； 2)流式细胞术检测含药血清作用前后MCF-7/ADR细胞表面P-gp的表达变化； 3)免疫印迹技术检测化痰散结方含药血清对MCF-7/ADR细胞中MRP蛋白（多药耐 药相关蛋白）表达的影响； 4)RT-PCR 法检测含药血清作用前后 MCF-7/ADR 细胞中基因 MDR1 及 MRP1 的表达 变化。 2.化痰散结方对MCF-7/ADR细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用 1)通过克隆形成实验，观察含药血清对细胞克隆形成的影响，计算克隆形成率； 2)流式细胞技术检测化痰散结方对MCF-7/ADR细胞的细胞周期的影响； 3)在荧光显微镜、电子显微镜下观察含药血清作用前后细胞的形态变化； 4)流式细胞技术检测化痰散结方对MCF-7/ADR细胞凋亡抑制基因Bcl-2的影响。 结果： 1.化痰散结方逆转MCF-7/ADR细胞多药耐药及机制研究 1)化痰散结方含药血清对MCF-7/ADR细胞的增殖有明显抑制作用，并随含药血清 浓度提高、作用时间延长抑制作用增强。 2)化痰散结方含药血清能显著抑制 MCF-7/ADR 细胞 P-gp 的表达，与对照组比较 有统计学意义(P0.01)；10%含药血清与 ADM 合用组同 VRP+ADM+10%正常鼠血清组比 较差异无统计学意义(P0.05)。 3)ADM可诱导MRP表达上调，而含药血清可使MRP表达下降，其作用随浓度增加 和作用时间的延长而增强。 4)MDR1 及 MRP1mRNA 在 MCF-7/ADR 细胞中高表达，化痰散结方含药血清作用于 MCF-7/ADR后，MDR1及MRP1mRNA的表达下降，呈浓度依赖性。 2.化痰散结方对MCF-7/ADR细胞的增殖抑制和诱导凋亡作用 1）随化痰散结方含药血清浓度递增，细胞克隆形成率逐渐下降。 2）化痰散结方含药血清可使耐药细胞株阻滞于G －G 期，并通过启动凋亡机制阻 0 1 止耐药细胞株增殖，并呈量效关系(P0.05)。 3）化痰散结方对MCF-7/ADR细胞超微结构的影响表明随着药物浓度提高和作用时 间延长，凋亡细胞的比例增高。 4）化痰散结方含药血清组可显著下调细胞凋亡抑制基因Bcl-2的表达,并呈量效 关系(P0.05)。 结论： 1. 化痰散结方作用于 MCF-7/ADR 细胞的耐药相关蛋白和基因，其机制可能与下 调耐药细胞 MDR1 及 MRP1 的 mRNA 和蛋白表达，减少药物外排，增加耐药细胞内药物 浓度有关。 2. 化痰散结方具有抑制肿瘤增殖和诱导凋亡的作用，其机制可能是作用于耐药 细胞 G /S 节点，使耐药细胞株阻滞于 G －G 期，下调细胞凋亡抑制基因 Bcl-2 的表 1 0 1 达，通过启动凋亡机制阻止耐药细胞株增殖。 关键词 化痰散结方；乳腺癌；MCF-7/ADR细胞；多药耐药（MDR） Effect of Phlegm Sanjie on Drug Resistance Cell Lines of Human Breast Cancer and the Mechanisms Speciality：Integrative Medicine Author ：Sun Changgang Tutor：Professor Qi Yuanfu ABSTRACT Objective: Study the ef