蚯蚓纤溶酶原激活剂的分离纯化及其性质 - 中国生物化学与分子生物学报.pdfVIP

ISSN 中国生物化学与分子生物学报 2005 年 8 月 ( ) CN 　113870Q Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology 21 4 :537～545 蚯蚓纤溶酶原激活剂的分离纯化及其性质 严宜明1) , 　孔 　键2) , 　李 　红2) , 　石 　男2) , 　隋红艳2) ( 1) 赣南医学院 ,赣州　341000 ; 2) 北京生物制品研究所 ,北京 　100024) 摘要 　为了从赤子爱胜蚓中获得主要表现为纤溶酶原激活活性的蛋白酶 ,采用盐析、离子交换层 ( 析、凝胶过滤层析和疏水吸附层析从蚯蚓组织匀浆中纯化出 6 种具有纤溶活性的酶组分 F1 、F2 、 F3 、F4 、F5 和 F6) . 它们均为单一多肽链 ;表观分子量分别为 28 500 、29 500 、26 100 、26 300 、14 850 和 32 800 ;经非还原型 SDSPAGE 和扫描仪扫描 , 纯度分别为 100 %、952 % 、965 % 、936 % 、98 %和 ( ) 978 % ;等电点 pI 均不高于 3 ;SDSPAGE 后 ,用 Schiff 试剂染色显示 F5 为糖蛋白 ;纯化的 6 种酶于 20 ℃～50 ℃保温 1 h ,酶活力基本不变 ;F1 和 F2 、F3 和 F4 、F5 和 F6 分别在pH 4～10 、4～11 、7～12 范 围内稳定;水解 BAEE 试验及纤溶活性抑制试验表明 ,F6 既是丝氨酸蛋白酶 ,又是含金属离子的蛋 白酶,其它 5 种酶为胰蛋白酶样的丝氨酸蛋白酶 ;免疫双扩散试验结果初步表明 ,F1 和 F5 以及它 们和其它 4 种组分之间无共同的抗原决定簇 ;用纤维蛋白平板法及以 Chromozym U 和 Chromozym PL 为底物测定 ,除 F1 外 ,其余 5 种酶的纤溶酶原激活活性明显强于其直接纤溶活性. 关键词 　赤子爱胜蚓 , 纤溶酶原激活剂 , 纯化 , 纤溶活性 , 丝氨酸蛋白酶 中图分类号 　Q556 Purification and Preliminary Characterization of Plasminogen Activators in Earthworm Eisenia foelida 1) 2) 2) 2) 2) YAN YiMing , KONGJian ,LI Hong ,SHI Nan ,SUI HongYan ( 1) Gannan Medical College , Ganzhou 　341000 , China ; 2) National Vaccine and Serum Institute , Beijing 　100024 , China) Abstract 　A variety of