具有血管内皮细胞生长因子受体-2 酪氨酸激酶 - 中国医药生物技术.pdfVIP

180 中国医药生物技术 2014 年 6 月第 9 卷第 3 期 Chin Med Biotechnol, June 2014, Vol. 9, No. 3 DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2014.03.004 ·论著· 具有血管内皮细胞生长因子受体-2 酪氨酸激酶抑制作用的 链霉菌次生代谢产物 2754R 的研究 蒋忠科，张洋，郭连宏，姜蓉，孙承航 【摘要】 VEGFR2-CD 为靶点的酶抑制剂筛选，获得了一株 目的 分离鉴定链霉菌 I06A-02754 发酵液中具血管内皮 阳性链霉菌株——I06A-02754 ，并从其发酵液水溶 生长因子受体-2 酪氨酸激酶（VEGFR2-CD ）抑制活性的强 性部分分离得到具有 VEGFR2-CD 抑制活性的强 极性次生代谢产物。 极性化合物 2754R 。本文报道了化合物 2754R 的 方法 采用大孔吸附树脂、阴离子交换树脂、MPLC 、HPLC 分离纯化和结构确认及其对 VEGFR2-CD 的抑制 等分离手段对次生代谢产物进行分离纯化；通过 UV 、IR 、 活性和对肿瘤细胞的细胞毒作用。 HR-ESI 质谱、1 2 D-NMR 和 D-NMR 对其结构进行鉴定， 以 ELISA 法检测其次生代谢产物对 VEGFR2-CD 的抑制 1 材料与方法 活性；以 MTT 法检测化合物对肿瘤细胞的抑制活性。 1.1 材料和仪器 结果 从发酵液的水溶性部分分离得到一个极性较大的胡 1.1.1 菌株 链霉菌 I06A-02754 来自本所菌种 桃霉素类次生代谢产物——2754R ；其化学结构与胡桃霉素 筛选中心，由本所生物工程室保存。 D 一致，对 VEGFR2-CD 表现出一定的抑制活性；MTT 实 1.1.2 培养基 验显示化合物 2754R 对 HepG2 细胞、MCF-7 细胞和 ⑴种子和发酵培养基：麦芽浸膏 5 g 、葡萄糖 BEL-7402 细胞没有明显的抑制活性（IC50 10 μmol/L ）。 5 g、蛋白胨 5 g 、牛肉浸膏 5 g 、玉米浆 4 g 、黄 豆饼 10 g 、淀粉 20 g 、碳酸钙 4 g 、蒸馏水 1 L ， 结论 化合物 2754R 是具有 VEGFR2-CD 活性的胡桃霉 pH = 7.1 。 素类次生代谢产物。 ⑵斜面 ISP2 （YM ）培养基：酵母粉 4 g 、麦 【关键词】血管内皮生长因子受体 2 ； 链霉菌属； 胡 芽浸膏粉 10 g 、葡萄糖 4 g 、琼脂 12 g 、蒸馏水 桃霉素 D 1 L，pH = 7.1 。 中国医药生物技术, 2014, 9(3):180-184 1.1.3 试剂 三氟乙酸（TFA ）、乙腈、甲醇、丙 酮、乙酸乙酯、氯化钠均为北京化工厂生产，分析 肿瘤血管的形成依赖于血管生长因子，如果阻 断这种生长因子，则可以抑制肿瘤的生长[1-2] 。血管 纯；HPLC 级乙腈为美国 SK Chemicals 公司产品；