酿酒酵母eby100 - 天恩泽.pdfVIP

列 系 沙 净 天 CAT#:12- 198 低温运输和-80℃保存 酿酒酵母 EBY100 Saccharomyces cerevisiae EBY100 使用手册 V1.0 北京天恩泽基因科技有限公司 北京市海淀区上地信息路 26 号北京市留学人员海淀创业园中关村创业大厦 506 网址： ；电话：400-6765278 ；电邮：order@ 产品及特点 EBY100 是酿酒酵母菌株，属于真核细胞，具有氨苄和卡那霉素抗性。 质粒转化条件为电转化，应用于酵母表面展示。此菌株必须生长在营养丰富的 培养基中，例如 YPD 培养基，无法在 minimal media 中生长。在 GAL1 启 动子的作用下，此菌株能够表达 AGA1 基因。EBY100 的配套载体是 pYD1 载体。 此菌株的基因型 如下 ：MATα ura3-52 trp1 leu2∆1 his3∆200 pep4::HIS3 prb1∆1.6R can1 GAL (pIU211: URA3) 。 规格及成分 成份 编号 热封袋包装 酿酒酵母 EBY100 12-198 1 mL 使用手册 1 份 运输及保存 低温运输，-80℃保存，有效期一年。 自备试剂 YPD 培养基、TE 缓冲液 （pH 7.5）、乙酸锂、DTT、山梨醇、超纯水等 使用方法 本手册提供一个质粒转化酵母的电转化方法，供参考。 一、感受态细胞制备 1. 挑一环酵母菌接种于 5 mL YPD 培养基中，30℃、250-300 rpm 培养 过夜； 2. 取适量的过夜培养液分别接种于两瓶 50 mL YPD 培养基中，30℃、 250-300 rpm 培养约 16- 18 小时（OD ：1.3-1.5）； 3. 于 4℃，4000 g 离心收集菌体，用 25 mL 冰浴的无菌水洗涤一次后，细 胞用 10 mL 冰浴的无菌水重悬，可换成较小的离心管； 4. 加入 1 mL 的 10×TE 缓冲液 （pH 7.5），摇晃均匀，再加入 1 mL 10 ×乙酸锂，旋转摇匀，于 30℃轻轻摇动 45 分钟 ； 5. 再加入 0.4 mL 1 mol/L DTT，并同时旋转摇动，于 30℃轻轻摇动 15 分钟 ； 6. 于 4℃，4000-6000 g 离心，弃上清（用枪吸），再用 25 mL 冰浴的无 菌水洗涤后 4℃离心，收集菌体 ； 7. 用 2.5 mL 冰冷的 1 mol/L 山梨醇重悬细胞，离心收集菌体，弃上清（用 枪吸） ； 8. 每管用 100uL 1 mol/L 的山梨醇溶解，分装于 EP 管中（80 uL/管）， 于-70℃冰箱保存。 二、电转化 1. 向感受态细胞中加入约 5～10 ug （体积小于10 uL）的 DNA