犬和猫狂犬病抗体检测试剂盒 - 上海必优生物科技有限公司.docVIP

美国SYNBIOTICS辛百克斯 犬和猫狂犬病抗体检测试剂盒 第一次使用该试剂盒，强烈建议您认真阅读完整篇说明书后再进行操作。 试剂盒操作概述： 1 预稀释样品 在一个空的微孔板里，用样品稀释液(SD)按照1：10预稀释样品(10ul样品加入90ul SD中) 2 预稀释WHO标准血清 在试管或微孔板里按7个稀释比例预稀释WHO狂犬标准血清，稀释比例分别为1:10, 1:25, 1:60 1:80, 1:170, 1:400和1:800。（如只做定性检测，可跳过此步） 3 最终稀释 酶标板微孔各加90ul样品稀释液，向A1，A2孔里加10ul阴性质控，向B1，B2孔里加10ul阳性质控（质控的最终稀释比例为1：10），向其他孔内分别加入10ul预稀释样品（样品的最终稀释比例为1：100）和10ul WHO预稀释血清（WHO血清的最终稀释比例为1:100, 1:250, 1:600, 1:800, 1:1700, 1:4000和1:8000） 4 孵育 用粘条封好，370C（±30C） 孵育1小时(±5分钟) 5 洗板 用蒸馏水或软化水按1:10稀释浓缩的洗涤液(W) ，小心揭开粘条，洗板多次 6 酶标记物反应 用酶标记物稀释液10倍稀释酶标记物（CJ），向每个酶标板微孔里加入100ul稀释后的酶标记物 7 孵育 用粘条封好，370C（±30C） 孵育1小时(±5分钟) 8 洗板 用蒸馏水或软化水按1:10稀释浓缩的洗涤液(W) ，小心揭开粘条，洗板多次 9 底物反应 向每个酶标板微孔里加入100ul过氧化物酶底物(PS)（底物无须稀释，可直接使用）。此步不要粘条，轻轻摇动酶标板使之混匀 10 孵育 室温200C(±50C) 孵育30分钟(±5分钟)，遮光 11 终止反应 向每个酶标板微孔里加入50ul终止液(S)（终止液无须稀释，可直接使用），轻轻摇动酶标板使之混匀，确保孔内无气泡 12 读值 用酶标仪在波长450nm和630nm下测量OD值 附WHO血清的保存与处理： WHO血清为冻干粉可以20C~80C冷藏保存。用1ml蒸馏水或去离子水稀释，必须-200C冷冻保存。复溶后视作6.7IU/ml的滴度。 1、试剂盒原理 SerelisaTM狂犬病抗体检测试剂盒可对犬和猫的血清里的狂犬病毒抗体进行定量检测。根据世界卫生组织(WHO)推荐，保护狂犬病毒感染所需的最低的抗体滴度为0.5IU/ml。反应包括以下三个步骤： 当血清样品加入后，血清里的抗体和微孔内包被的狂犬病毒抗原相结合。 洗板后加入蛋白A/过氧化物酶标记物，它和固定在微孔上抗原捕获的抗体形成一个复合物：(狂犬病毒抗原)-(狂犬病毒抗体)-(蛋白A/过氧化物酶标记物)。 多余的酶标记物被洗掉，与复合物相联的过氧化物酶与加入的底物反应形成有颜色的化合物。终止反应后，测量吸光值(OD值)，抗体的有无可以通过阳性质控的临界值来确定。 2、试剂盒成分和保存 原试剂 配制和保存 a. 酶标板：包被有狂犬病毒抗原（6条X16孔） 拆封后4周内使用，使用后立即封好 b. 酶标记物：蛋白A/过氧化物酶(CJ) 用酶标记物稀释液10倍稀释，24小时内用完 (10X浓度) c. 过氧化物酶底物(PS) 直接使用 d. 阴性质控(N) (10X浓度) 稀释后，24小时内用完 e. 阳性质控(P) (10X浓度) 稀释后，24小时内用完 f. 样品稀释液(SD) 直接使用 g. 洗涤液(W) (10X浓度) 稀释后，48小时内用完 h. 酶标记物稀释液(CD) 直接使用 i. 终止液(S) 直接使用 j. 粘贴膜 6条 注意：稀释后的试剂保存于3-50C，在上述时间内使用。 3、所需的材料和试剂但本试剂盒没有提供 *WHO标准血清 *蒸馏水或去离子水 * 0-1000ul可调移液器 *100ml和1000ml的量筒 *手工洗板或洗板机 *有450nm和630nm酶标仪 *370C的孵育箱(误差30C) 4、使用注意事项 检测结果的好坏取决于良好的实验技巧和操作步骤(详见6.操作步骤) *