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纤维素酶在动物营养中的应用 自从1906年Seiiliere 在蜗牛的肖化液中发现能够分解天然纤维素的纤维素酶以来，纤维素 酶的研究受到动物营养界的普遍关注，尤其是近年来随着生物工程技术的发展，对纤维素酶 的生产和应用的研究取得了一定的成果。 1 维素酶的种类 纤维素酶按其来源可分为真菌源性纤维素酶和细菌源性纤维素酶两种。细菌源性的纤维素酶 来源于分解纤维素的细菌，如瘤胃细菌 （黄化瘤胃球菌、白色瘤胃球菌等）和热纤梭菌等， 产量和活性较低。真菌源性纤维素酶来源非常广泛，所有能分解晶体纤维素的真菌，均能或 多或少的分泌纤维素酶。目前，国内外工厂化生产采用的菌种大多数是木霉、曲霉和青霞等。 生产高质量纤维素酶的关键是高产菌株的选育，我国 20 世纪70 年代就开始了这方面研究， 目前已利用现代生物工程技术进行诱变培养，选育出了康代木霉 NT15－H、NT15－HI、黑曲 霉XT15—H、XT15－HI、绿色木霉等高产菌株，并投入工厂化生产。 2 纤维素酶的组成 纤维素酶是一种多组分的酶系，采用各种层析、电泳等技术可将纤维素酶分成不同的组分。 就目前研究结果看，至少包括三类性质不同的酶。 2．1 内切β-1，4-葡聚糖酶来自真菌简称EG，来自细菌简称Len。这类酶一般作用于纤维素 内部的非结晶区，随机水解β-1，4-糖音键，将长链纤维素分子截短，产生大量带非还原性 末端的小分子纤维素如纤维糊精、纤维二糖、纤维三糖等。 2．2 外切β-1，4 一葡聚糖酶来自真菌简称CBH，来自细菌简称 Cex。此类酶可从纤维素酶 的非还原末端一 一 地依次切下葡萄糖单位，产物为α一葡萄糖。该酶对纤维寡糖的亲合 力强，能迅速水解内切酶作用产生的纤维寡糖，其专一性较强。 2．3 β-葡萄糖着酶简称 BG。该酶可水解纤维二糖和短链纤维寡糖生成葡萄糖。对纤维二糖 和纤维三糖的水解很快，随葡萄糖聚合度的增加水解速度下降。该酶的专一性差，实际上可 作用于所有的葡萄糖β-二聚物。 2.4 三类酶的协同降解机制 上述三类纤维素酶在分解纤维素时，任何单独一种都不能裂解晶体纤维素，只有三种酶共同 存在并协同作用时才能完成水解过程。一般来说，外切酶作用于不溶性纤维素的表面，使形 成晶体结构的纤维素分子链裂开，长链分子末端部分发生游离，从而使纤维素易于水化；内 切酶则作用于经外切酶活化的纤维素，分解其β-1，4-糖苷键，产生纤维二糖、三糖等短链 低聚糖；β-葡聚糖苷酶再将纤维二糖、纤维三糖等分解为葡萄糖。应当指出，该协同降解作 用的顺序不是绝对的，而且各酶的功能也不是这样简单固定的。 3 纤维素酶的理化性质 不同来源的纤维素酶理化性质不尽相同。同一菌株产生的同一酶在不同报道中也存在一定的 差异。如Inghn 等（1980）报道的来源于拟氏木霉 （Tri－chodennreesei）的β-葡萄糖苷酶 的最适pH 值为6.5，在40℃下最稳定，以纤维H 糖为底物的Km 为33nunol ／l，分子量为98KD， 而Fogarty 和Kelly （1990）描述的拟氏木霉来源的β-葡萄糖甘醇的分子量为47KD，等电点 （PI）为 5．47，同时，Woodward （1981）报道的拟氏木霉来源的β-葡萄糖苷酶的最适 pH 为4.8，以纤维二糖为底物的Km 值为1．9mmol/l。 多数真菌和少数细菌的纤维素酶都可糖基化。糖基与蛋白质间以共价键结合，或 可解离的 络会状态。糖基化作用在一定程度上可保护纤维素酶免受蛋白酶的水解，同时，纤维素酶由 于糖基化使其 含碳水化合物比例在不同酶之间发生差异，导致酶的多形式和分子量的差异。 真菌的EG 包括两种异构酶EGI 和EGlll。EGI 的PI 为4．2，分子量为54KD，由437 氨基 酸组成。EGHl 的PI 为4．8－5．6，分子量为49．SKD，由397 氨基酸组成。木霉的CBH 的异构酶为CBHI 和CBHI。其中CBHI 的PI 为4．2，分子量为66KD，由496 氨基酸组成。 CBHI 的PI 为59，分子量为53KD，由447 氨基酸组成。BG 的PI 为7．5－8．5，分子量为 70－80KD，由714 氨基酸组成。 4 纤维素酶的结构 对纤维素酶结构的研究表明，尽管氨基酸排列顺序不同，但许多酶的蛋白质构架却有一定的 相似性。一般纤维素酶分子是由具有催化功能的催化域 （Cellulosbinding domains CB