chd1基因与人类胶质瘤的发生、发展机制的研究现状 王伯玉 吉大一 .docVIP

CHD1基因与人类胶质瘤的发生、发展机制的研究现状 王伯玉　　吉大一院神经外科　学号：2011734143 人类CHD蛋白家族属于SWI2/SNF2相关的ATP酶超家族，该家族因蛋白质从氨基端开始依次含有染色质调节域（Chromdomains）、类SWI2/SNF2 ATP酶/解旋酶域（SWI2/SNF2-like ATPase/Helicase）和DNA结合域（DNA-binding domain）而得名。其中，类SWI2/SNF2 ATP酶/解旋酶结构域保守性最强，这一结构域存在于多种依赖于ATP的核小体重构复合物中。CHD基因突变或表达异常与人类某些肿瘤有关。 CHD基因首先在克隆DNA结合核蛋白-kY编码基因的过程中被发现。到目前为止，已经发现有6个人类CHD蛋白家族成员，包括CHD1、CHD2、CHD3、CHD4、CHD1和CHD6，它们分别编码1709，1739，1944，1937，1954和2715个氨基酸。根据编码蛋白序列的保守性，该家族被划分为三个亚族：CHD1和CHD2组成了I亚族，CHD3、CHD4和CHD1为II亚族，CHD6为III亚族。 心、脑、胎盘、肺、肝、骨骼肌、肾和胰脏等多组织的Northern杂交结果表明，CHD1基因仅在脑和神经组织中表达，提示该基因可能在神经发育过程中发挥重要作用。CHD1基因定位于1号染色体短臂3去6带(1p36)，1p36的缺失是人类癌症中普遍存在的遗传损伤，发生于上皮，神经，造血起源的恶性肿瘤中。国外学者用染色体工程学方法制造出小鼠模型，带有人染色体1p36相关区域的存在和丢失，此方法功能性的鉴定出CHD1作为肿瘤抑制基因能够通过p19/p53途径控制增殖/凋亡/和衰老，证明了CHD1在体内作为肿瘤抑制基因的功能，表明人类癌症与CHD1缺失有关。此肿瘤抑制基因的鉴定为临床肿瘤治疗提供了新的途径。 抑癌基因启动子区DNA甲基化是导致其功能失活的重要机制。叶酸代谢能为机体 甲基化提供活性甲基，甲硫氨酸合成酶（methionine synthase，MS）是叶酸代谢顺利进行的重要保障因素。 MS基因多态性与抑癌基因CHD1甲基化及乳腺癌发病的关系的研究证明：CHD1甲基化与乳腺癌发生密切相关，MS多态性可能通过影响部分肿瘤相关基因发生甲基化而调控其表达。 运用聚合酶链反应(PCR)技术为基础的杂合性缺失分析(LOH)法对胶质母细胞瘤染色体1p36上的微卫星多态标记序列研究表明胶质母细胞瘤染色体1p36发生高频率杂合性缺失，这提示位点D1S214-D1S2666缺失区域间可能存在着与GBM发生有关的抑癌基因． 应用SYBR G reen I实时定量RT-PCR技术研究大肠癌CHD1基因检测结果与临床病理参数和预后的关系。结果表明CHD1 mRNA表达阳性率在癌组织和癌外组织间无差异。大肠癌组织CHD1 mRNA的表达水平显著低于癌外正常组织。大肠癌浸润越深，癌组织CHD1 mRNA的表达量越少。随访病例研究以中位数为界，将癌组织CHD1分为高、低表达组，CHD1 mRNA高、低表达组间无瘤生存率差异无统计学意义，上述研究表明CHD1基因与大肠癌有关，其表达水平可能成为判断大肠癌恶性潜能的指标。大肠癌组织CHD1 mRNA的表达水平对患者生存期和无瘤生存期无显著影响。 应用PCR扩增CHD1基因的编码区，使用基因重组方法构建真核细胞表达载体peGFPc1-CHD1，实时定量PCR技术检测重组质粒peGFPc1-CHD1转染293T工具细胞后能有效扩增CHD1基因编码区，构建peGFPc1-CHD1真核细胞表达质粒，测序分析表明所克隆的CHD1基因编码区序列无误。实时定量PCR检测结果表明重组质粒peGFPc1-CHD1能有效地过表达CHD1基因。此方法能成功地构建人CHD1的真核细胞表达载体peGFPc1-CHD1，并在工具细胞中实现表达，为进一步研究奠定了实验基础。 目前，系统地检测CHD1基因在脑胶质瘤中的表达情况及CHD1基因对胶质瘤的诊治情况在国内外尚未见报道。探讨CHD1基因的表达与人脑胶质瘤发生、发展的关系，并通过体外转入胶质瘤细胞野生型CHD1抑癌基因，研究CHD1在胶质瘤诊断及预后方面的应用价值，探讨CHD1基因用于胶质瘤基因治疗的可行性将会对胶质瘤的诊治及预后有重要意义和广阔的应用前景。 参考文献 5 Idoia Garcia， Gemma Mayol ， Eva Rodríguez ， Mariona Su?ol Expression of the neuron-specific protein CHD1 is an independent marker of outcome in neuroblastoma. Molecular Cancer