吖啶橙2罗丹明6g荧光共振能量转移及其罗丹明6g荧光猝灭法测定 .pdfVIP

第 33卷 分析化学 ( FENX I HUAXU E) 　研究简报 第 4 期 　　　　　　　　　　　　 　　　　　　　　　　　　 2005年 4 月 Ch ine se Jou rnal of A nalytical Chem istry 546 ～548 吖啶橙 罗丹明 6G荧光共振能量转移及其 罗丹明 6G荧光猝灭法测定蛋白质 刘保生 　高 　静 　杨更亮 ( ) 河北大学理化分析中心 ,河北省分析科学技术重点实验室 ,保定 07 1002 ( ) ( ) 摘 　要 　研究了吖啶橙 AO 与罗丹明 6G R6G 之间能量转移的最佳条件 。在 pH = 7. 20 的 TirsHCl缓冲溶 液 ,十二烷基苯磺酸钠介质中 , AO R6G能够发生有效能量转移 ,使 R6G荧光增强 。蛋白质的加入使 R6G荧 光猝灭 , 以此建立了利用 AO R6G荧光共振能量转移间接测定蛋白质的新方法 。牛血清 白蛋白、人血清 白蛋 白工作曲线线性范围分别为 1. 0 ～31和 1. 0 ～30 m g/L ; 检出限分别为 0. 32和 0. 33 m g/L ;平行 6次测定相对 标准偏差为 1. 1% ～2. 0% ; 回收率为 96. 7% ～103. 2 % 。此方法的稳定性好 ,选择性高 ,用于人血清试样中总 蛋白含量的测定 ,与常用的双缩脲法基本一致 。 关键词 　吖啶橙 ,罗丹明 6G,荧光共振能量转移 ,猝灭法 ,蛋白质 1　引　　言 荧光共振能量转移是指电子激发能 ,在适当的能量给予体和接受体对之间的传递 ,传递距离最大可 达 7. 0 ～10. 0 nm 。该方法已用于无机离子 [ 1 ] 、有机物 [ 2 ] 、生物 [ 3 ] 、分子微区结构的分析以及作为核酸荧 光探针的研究[ 4 ] 等许多领域 。具有比光度法灵敏度高 ,与常规荧光法和共振光散射相比受瑞利散射光 干扰小 ,重现性好的特点[ 5 ] 。本方法作为表征蛋白质的荧光探针的研究尚未见报道 。本实验利用吸收 ( ) ( ) 光谱和荧光光谱 ,研究了在十二烷基苯磺酸钠介质中 , 以吖啶橙 AO 作为能量给体 ,罗丹明 6G R6G 作为能量受体的能量转移体系 ,发现当 AO 和 R6G摩尔比为 1 4∶时 ,其能量转移最好 ,蛋白质的加入又 使其 R6G荧光猝灭 。以此建立起 AO R6G能量转移荧光猝灭法测定蛋白质的新方法 。该体系与蛋白 质作用快 ,方法简便 ,选择性好 ,线性范围宽 ,重现性好 。 2　实验部分 2. 1　仪器与试剂 ( ) ( ) RF540 荧光分光光度计 日本岛津公司 ; F4500 荧光分光光度计 日本 日立公司 ; UV 265 紫外 ( ) ( ) ( ) 可见分光光度计 日本岛津公司 。牛血清白蛋白 B SA