关于男性生育力的人精子顶体内顶体蛋白酶和透明质酸酶作用解析.docVIP

关于男性生育力的人精子顶体内顶体蛋白酶和透明质酸酶作用解析 李林 吴励梅 罗一平 田小燕 李彩英 徐妙容 （广东省佛山市顺德区第一人民医院生殖健康与不孕科 佛山528300） 摘要：目的：解析精子透明质酸酶（HYD）和精子顶体蛋白酶（ACE）在男性生育力中所起的作用。方法：以不育者为实验组，以来我院检查身体的健康正常生育男性为对照组，用明胶底物膜法对精子样本检验，并进行组间对比。结果：实验组精子畸形率较高，ACE 阳性率、活性强度、HYD 阳性率、活性强度均低于对照组，且精子密度及活性与上述指标呈正相关，P＜0.05。结论：HYD及ACE在男性生育能力中起到至关重要的作用。 关键词：男性生育力；精子；ACE；HYD 中图分类号：R 文献标识码：HYD）和精子顶体蛋白酶（ACE）与男性生育能力相关，但其具体所起的作用却未经证实[1~2]。本研究采用细胞染色技术对精液样本进行观察，并通过与正常人比较来探讨其作用。现报道如下： 1 资料与方法 1.1 临床资料 本研究选取2013年4月~2015年9月间在我院生殖健康与不孕科就诊的不育症患者为实验组，同时以身体健康正常生育男性为对照组。诊断标准：前向运动（PR）级精子百分率＞32%、精子密度＞15×106/ml为正常[3]。纳入标准：已婚且有1年以上同居经历；夫妻性生活正常；处在正常可生育年龄范围内（本研究选取24~35岁患者）。排除标准：因女方原因导致不育。经纳入、排除后共选入对象70例。实验组20例，年龄24~35岁，平均（29.32±2.16）岁，按精子活动率和精子密度各分为三组。对照组50例，年龄24~35岁，平均（29.15±2.09）岁。两组一般资料对比，无明显差异（P＞0.05），具有可比性。 1.2 方法 用明胶底物膜法对精子样本检验，对比正常男性与不育者精子样本差异，分析人精子顶体蛋白酶与透明质酸酶的作用。研究对象需要禁欲3~7 d，采用手淫法取精液，全部收集于干燥无菌取精杯中，放置37 ℃恒温箱内孵育，待液化后精液样本处理。通过人工镜检法准确计数精子畸形率、活动率、密度。移取精液于15 ml锥形管内，相对离心力900 g离心10 min，将精浆上层去除，用磷酸盐缓冲液（PBS）对沉淀物洗涤，用2倍体积的PBS将洗涤后的沉淀物悬浮，取1~2滴悬浮液，滴于明胶膜片上，保持温度在37 ℃恒温内3 h，干燥后涂片、孵育、对其进行观察。 HYD检测法：在0.2 mol/L的醋酸-醋酸钠缓冲液中放入药盒底膜片，缓冲液PH值为4，保持20 min，以矫正PH值。将以上的PBS精子悬浮液取1~2滴在药盒底膜片上涂抹，并放在温度37 ℃的恒湿恒温箱中孵育。孵育3 h后取出，并在室温下进行干燥，干燥后置于普通光镜下对孵育结果观察。ACE检测法：把药盒底膜片放入巴比妥钠醋酸缓冲液当中，10 s后取出，并进行干燥处理。干燥后将精子PBS悬浮液均匀铺开在底膜片上1~2滴，放于温度37 ℃的恒温恒湿箱当中孵育，于2 h后取出，并在室温下做干燥镜检[4]。 观察组患者根据精子密度不同进一步分组，其中M1组精子浓度＞40×106/ml，M2组精子浓度15~40×106/ml，M3组精子浓度＜15×106/ml。同时，根据精子活动率不同进一步分组，其中H1组PR＞50%，H2组PR32%~50%，H3组PR＜32%。 1.3 评定标准[5~6] 本次实验检测用显微镜型号均为Leica DME，一般检测所用视野六个左右即可，随即选取200个精子头部对其进行观察检测，检测结果显示其头部周围存在不同程度的晕环情况即可判定为HYD或ACE阳性。确定阳性后，医护人员需要选取专业合理的测微尺测量精子头部周围晕环的直径，整理分析不同测量数据，最终得出平均值，根据该数值能够对HYD或ACE的活性强度进行判定。 1.4 观察指标 主要对两组患者的精子密度及活性指标进行观察，同时观察分析实验组患者精子密度与ACE和HYD及精子活动率与ACE和HYD之间的关系。 1.5 统计学方法 将所有研究数据纳入SPSS19.0 软件，计量资料以（x±s）表示，用t检验；计数资料以率（%）表示，用X2检验。判定统计学差异的标准为P＜0.05。 2 结果 2.1 正常人与不育患者的精子密度及活性相关指标比较 见表1。HYD阳性率、活性强度及ACE阳性率和活性程度比较，实验组低于对照组，而精子畸形率比较，则实验组较高，P＜0.05。 表1 实验组与对照组精子密度及活性指标比较（x±s） 组别 n HYD 活性强度（μm） ACE 阳性 （%） 精子畸形率 （%） HYD 阳性 （%）