蛋白酶从Mucor提取.docVIP

实验一：从毛霉中提取蛋白酶及分离方案 组员：周云线 周丽玲 陆江妙 1 实验原理 毛霉又叫黑霉、长毛霉 HYPERLINK /view/176302.htm \t _blank 接合菌亚门 HYPERLINK /view/1275543.htm \t _blank 接合菌纲 HYPERLINK /view/699609.htm \t _blank 毛霉目 HYPERLINK /view/167883.htm \t _blank 毛霉科 HYPERLINK /view/38703.htm \t _blank 真菌中的一个大属。以 HYPERLINK /view/344952.htm \t _blank 孢囊孢子和 HYPERLINK /view/190512.htm \t _blank 接合孢子繁殖 HYPERLINK /view/65671.htm \t _blank 菌丝无隔、多核、分枝状，在基物内外能广泛蔓延，无 HYPERLINK /view/190500.htm \t _blank 假根或 HYPERLINK /view/1322132.htm \t _blank 匍匐菌丝，在高温、高湿度以及通风不良的条件下生长良好。毛霉常出现在酒药中，能 HYPERLINK /view/1214221.htm \t _blank 糖化淀粉并能生成少量 HYPERLINK /view/3010.htm \t _blank 乙醇，产生 HYPERLINK /view/265194.htm \t _blank 蛋白酶，有分解 HYPERLINK /view/1321671.htm \t _blank 大豆蛋白的能力，我国多用来做 HYPERLINK /view/154032.htm \t _blank 豆腐乳、 HYPERLINK /view/19959.htm \t _blank 豆豉。许多毛霉能产生 HYPERLINK /view/39573.htm \t _blank 草酸、 HYPERLINK /view/83106.htm \t _blank 乳酸、 HYPERLINK /view/83144.htm \t _blank 琥珀酸及 HYPERLINK /view/833.htm \t _blank 甘油等，有的毛霉能产生 HYPERLINK /view/728267.htm \t _blank 脂肪酶、 HYPERLINK /view/388071.htm \t _blank 果胶酶、 HYPERLINK /view/571157.htm \t _blank 凝乳酶等。工业中利用其蛋白酶以酿制 HYPERLINK /view/44420.htm \t _blank 腐乳、豆豉等。皮革工业的脱毛和软化已大量利用蛋白酶，既节省时间，又改善劳动卫生条件。蛋白酶还可用于蚕丝脱胶、肉类嫩化、酒类澄清等。 酶活定义： 在4 0℃， p H7.2条件下， 1分钟内水解酪蛋白产生 l微克酪氨酸所需的酶量为1个蛋白酶活力单位。蛋白酶水解络蛋白，其产物络氨酸能在碱性条件下使福林-酚试剂还原，生产钼蓝与钨蓝，在680nm下测定其吸光度，可求得蛋白酶活力。考马斯亮蓝是一种染料，在游离状态下呈红色，当它与蛋白质结合后变为青色。蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收，其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg／mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。 蛋白质在水中的溶解度受到溶液中盐浓度的影响。一般在低盐浓度的情况下，蛋白质的溶解度随盐浓度的升高而增加，这种现象称为盐溶。而在盐浓度升高到一定浓度后，蛋白质的溶解度又随盐浓度的升高而降低，这种现象称为盐析。在蛋白质的盐析中，硫酸铵最为常用，这是由于硫酸铵在水中的溶解度最低而且温度系数小不影响酶活性，分离效果好。 2 仪器 恒温培养箱、振荡摇床、恒温振荡器、离心机、722分光光度计、pH计、恒温水浴锅 培养基 斜面培养基PDA培养基： 称取200g马铃薯，洗净去皮切成小块，加水1000mL煮沸半个小时或高压蒸煮20分钟，纱布过滤，再加10-20g葡萄糖和17-20g琼脂，充分溶解后趁热纱布过滤，分装试管，每试管约5-10mL（视试管大小而定），121℃）灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面，冷却后贮存备用。 固体培养基：麸皮10g，水12mL，自然 pH值，适量装入 250mL三角瓶中，l2l℃灭菌30min后趁热及时摇散，备用。 液体培养基：蛋白胨20g、葡萄糖10g、氯化镁2g、磷酸二氢钾2g，250mL锥形瓶装样量50mL，l2l℃灭菌30min，培养72h。 4 相关溶液 福林