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X连锁凋亡抑制蛋白对肺癌细胞生长和细胞周期的影响.pdf
第25卷第3期 石河子大学学报(自然科学版) V01．25No．3
2007年6月 Jol衄a】of蛳hezi Jhn．20Cr7
UIlivells时(NatI瑚】Science)
文章编号：10ar7．7383(200r7)03—0335—04
X连锁凋亡抑制蛋白对肺癌细胞生长
和细胞周期的影响
高岩1，苏远2，白明2，金阳2，朱莉萍3
3华中科技大学同济医学院病理生理学系中心试验室，湖北武汉430022)
摘要：为了研究靶向x连锁凋亡抑制蛋白的发夹状RNA对肺癌细胞中抗肿瘤作用，构建ⅪAP基因的sIlRNA表达
果表明：转染画RNA．ⅪAP组细胞ⅪAPH皿NA和蛋白水平均低于正常对照组，生长慢于正常组(￡=16．82和t=12．
能下调ⅪAP的表达水平，对J·鳓细胞增殖和细胞周期亦无明显影响。结论：针对ⅪAP的m忱干扰质粒特异性地
抑制了其RNA和蛋白水平，使肺癌细胞A549生长减慢，诱导凋亡，并使其发生G2／M期阻滞，有望发展为新的抗肿
瘤药物。
关键词：砌4A；ⅪAP；肺肿瘤；凋亡；细胞周期
中图分类号：R735．9 文献标识码：A
X连锁凋亡抑制蛋白(X．1iIll【ed“1ibit僻0f_
陶宛MBI公司，T4连接酶为购自美国№ga公司，
印。呻is凹Itein，ⅪAP)N端含有有3个杆状病毒LAP阳离子脂质体购自美国蜥舭公司，凝胶回收试
iIlllibitor
重复序列区(b8cul0忻ralof印opt憾is嘲瑚l，剂盒、质粒抽提试剂盒购自美国吣公司，含
SYBRGreen
Bm)，不仅可以凭借Bm功能域直接抑制胱天蛋白
酶．3、．7、．9的活性阻止细胞凋亡【1，2|，还可以通过C
p．actin分别购自美国RD和saI她c腿公司。
端环指结构域(riIlgfingerdomain)发挥泛素连接酶功
1．1．2菌种、质粒
能，介导胱天蛋白酶．3经蛋白酶体26S水解【3l。
ⅪAJP除了在外周血液的白细胞外，在几乎人体的各
同济医学院卫生部呼吸重点试验室保存。
组织器官中都有ⅪAP的rIlIiNA表达[4I，但是在恶性
肿瘤组织中表达水平明显升高，认为它可能在细胞 1．2方法
的增殖过程和细胞向恶性转化过程中发挥重要作 1．2．1 psiR№XIAP质粒的构建
用【5，6|。为此本试验采用砌忱干扰技术下调ⅪAP 参考文献[7]中的方法，设计针对ⅪAJP基因的
基因的表达，分析肺癌细胞生长和细胞周期的变化，
初步探讨其在肺癌基因治疗中的效应。 伽47勿口7翻一翻翻贸删，倒口衄4勿俐d丁
町‘3；反义链：5’
1材料与方法
ACrIICl、(1rI．GAAGTAA7I’GACT凹ATAGo～CAT
3’；阴性
1．1 材料 对照正义链5’rI℃CCAGG代；CrAGTACAAGT℃CGACT
1．1．1试剂 CA Tr‘3；反义链
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