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崮艺学报2(】【】2，29(1)：1～4
一个与苹果属显性矮生主基因Dw连锁的RAPD标
＆塑丝迪!些型些一
记
毕晓颖1 吴禄平1 安利佳2
(：沈阳农业大学园艺系，沈阳110161；2大连理工大学牛化J二程研究所．大连116012
f
摘要：运用RAPD技术，采用集群分折法进行r苹果抗寒矮化种质资源扎矮76[Mdu,,bocctmJ1．)
Borkh．]显性矮氅主基因ow连锁的分子标记研究。研究结果表明．扎矮76的矮生性状由显性单基剧拧
制，R-kPD标记OPEl5—1001与Dw基因连锁，其连锁距离为O．69
cM=．这为最终定伸及克降该矮肆．基因打F
基础
关键词：苹果属i踟基因；RAPD标记；矮生
中圈分类号：S661 786 04
I；Q 文献标识码：A 文章编号：0513—353X(2002)ol一0001
随着苹果矮化密植集约化栽培的发展，迫切需要优良的矮化砧木和矮化品种，目前牛产r应用的
矮化砧木和矮化品种的矮化性状由多基因控制，通过常规育种技术很难进行遗传改良。t991年内蒙
古呼伦贝尔盟农科所发现一株普通山定子皱叶矮生突变株，定名为扎矮76、进一步研究发现，泼矮
生性状由显性矮生主基因胁控制，这足世界J．首次发现的极其珍贵的苹果矮生源”一。该基罔的分离
对了解苹果矮化机制及利用基因工程实现矮化砧术和矮化品种的遗传改良具有重人意义 为进一步研
究该基因，我们于1998年春以寒富(富士×东光)为母奉，以扎矮76为父夺进行杂交，获得r￡批
基因分离群体。目的基因的克隆与分离往往依赖于与该基因连锁的分子标记。R～PDi!o技术是近年来
发展起来的分子标记方法，具有多态性水平高、不需预先知道模板DNA序列信息和I)NA样品用量少
等优点：因此，本研究利用RAPD技术采用集群分离分析(BulkedSe．greganlAna】v、两BSA)山‘法3筛
选与凸。基因连锁的分子标记，旨在为该矮生基因的定位与克隆打下基础。
1材料与方法
1．1 供试材料
117株，矮生型植株j13株。
1．2研究方法
1．2．1
电泳法测定，最后将模板浓度调至15ng／pL。
1．2．2 PCR扩增与产物检测PCR扩增反应在PEOf／00型DNA扩增仪卜进行。反应体_{{}{207 cL_其中
2
2，5mmol／L，dATP、dCTP、dGTP、d‘11rP各0．2ngnol／k，引物0
Trls-HCllommol／L(pH8．0)，Mgck
5～50 min，
u1曲DNA聚合酶(TaKaRa)。整个反应程序为：95℃预变性5
；．unol／l，总DNAng，0．5
40
s，37=C退火lmln，72℃延伸l埘n m”，扩增产
94℃变性30 s，扩增45个循环，最后72℃延伸5
物在1．5％琼脂糖凝胶中电泳，经EB染色在紫外灯下观察，记录多态性片段。
1 2．3 Dw基因分子标记研究根据植株形态将杂种分为普通型、矮生型两个集群．分别提取杂种
株后代的DNA样品等量混合，构成一对矮生型和普通型近等基因池，对这两个混合的DNA进行PCR
收稿日期：200l—11—02；修回日期：2002—01—15
基盒项目：农业部重电科研计划“高新技术与基础研究”项日(95农15～03)；辽宁省科委资助项H(962332
园 艺 学 报 29卷
扩增筛选引物，扩增产生多态性的引物可能是与Dw基因相关的RAPD引物，再以杂种后代群体中每
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