血必净注射液对小肠缺血再灌注大鼠肠道免疫屏障的作用.pdfVIP

提 要 目的：观察中药血必净注射液对肠缺血再灌注损伤大鼠细胞因子、肠道病理形态 学、肠道免疫细胞中P53基因表达的影响，探讨肠缺血再灌注损伤后中药多靶点保护 肠道免疫屏障的作用机制。 方法：（1）造模研究：将Wistar大鼠随机分为4组：①对照组（NOR ）；②模型 组1 （MG1 ）；③模型组2 （MG2 ）；④模型组3 （MG3 ）。分别夹闭肠系膜上动脉30分 钟、45分钟、60分钟，对模型进行血清内毒素和多项生化指标检测，观察重要脏器病 理形态学改变和大鼠72小时死亡率，筛选理想的夹闭时间。（2）将Wistar大鼠随机分 为4组:①正常对照组(NOR)；②模型对照组(CON)；③抗生素组(ANT)；④血必净 注射液组(XBJ)。选择最佳造模方法制备小肠缺血再灌注大鼠模型，采用ELISA方法， 分别观察造模后24、48和72小时血清细胞因子（TNF-a ，IL-1和IL-6 ）水平的改变； 采用HE染色法，分别观察造模后24 、48和72小时小肠病理形态学改变，测定肠粘膜 厚度、肠绒毛高度和肠粘膜损伤指数。（3 ）将Wistar大鼠随机分为2组:①模型对照组 (CON)；②血必净注射液组(XBJ)。选择最佳造模方法制备小肠缺血再灌注大鼠模型， 采用免疫组化双染色法分别观察造模后24、48和72小时大鼠小肠粘膜固有层内CD4+ 、 + + CD3 、CD8 T淋巴细胞及IgA浆细胞中P53基因表达的情况，比较血必净注射液组与对 照组P53基因表达的差异。 结果：（1）与对照组比较，模型组2和模型组3大鼠血清内毒素水平和UREA 、 CREA、ALT等有关生化指标明显升高（P0.01），重要脏器出现明显病理损害，符合 MODS模型标准。三组（MG1 、MG2和MG3 ）大鼠72小时死亡率分别为10%、20% 、 70% 。综合指标表明夹闭45分钟效果最为理想。（2）模型对照组造模后血清TNF-a 、 IL-1和IL-6水平均显著高于正常对照组（P0.01）。抗生素组较模型对照组而言，血清 TNF-a水平在造模后72小时显著降低（P0.01）；血清IL-1水平在造模后48、72小时 显著下降(P0.01)；血清IL-6水平在造模后24、48、72小时显著下降(P0.01)。血必 净注射液组造模后24、48、72小时血清TNF-a 、IL-1和IL-6水平较模型对照组、抗生 素组显著下降(P0.01)。模型对照组肠粘膜厚度、肠绒毛高度均较正常对照组显著降 低，肠粘膜损伤评分升高(P0.01)；血必净注射液组和抗生素组较模型对照组肠粘膜 厚度、肠绒毛高度显著升高，肠粘膜损伤评分降低(P0.01)；血必净注射液组和抗生 素组相比较，肠粘膜厚度、肠绒毛高度显著升高，肠粘膜损伤评分降低(P0.01)。（3 ） + + 造模后48、72小时CD4 、CD3 T淋巴细胞及IgA浆细胞中P53基因表达对照组高于血必 净注射液组(P0.05，P0.01)；CD8+ T淋巴细胞中P53基因表达造模后24、48、72小 + 时两组均无差异性(P0.05)。对照组CD4 T淋巴细胞中P53基因表达造模后72小时比 + T淋巴细胞中P53基因表达造模后72小时比24小时高 24、48小时高 (P0.01)；CD3 (P0.01)；IgA浆细胞中P53基因表达造模后72小时比24、48小时高(P0.05)。血必净 注射液组CD3+ T淋巴细胞中P53基因表达造模后72小时比24小时低(P0.05)。 结论：模型组2在致伤因素、器官功能、病理形态和死亡率等方面均符合MODS 模型的标准，是较理想的模拟临床肠缺血再灌注损伤诱发MODS 的模型。血必净注射 液能有效地降低小肠缺血再灌注大鼠血清TNF-a 、IL-1和IL-6水平；可以显著减轻小 肠缺血再灌注所致肠粘膜损伤；能够通过对肠壁免疫细胞中凋亡基因P53表达的调控， 实现对肠道免疫屏障的保护作用。 关键词 血必净；小肠缺血再灌注；细胞因子；肠道免疫细胞；P53；免疫屏障 The Effect of Xuebijing injection (XBJ) on the Gut Immunologic