不同培养条件对益母草悬浮培养细胞生长的影响.pdfVIP

第29卷 第2期 西华师范大学学报 (自然科 学版 ) 2008年6月 V01．29 No．2 Journal of China West Normal University(Natural Sciences) Jun．2008 文章编号：1673—5072(2008)02-0136-05 不同培养条件对益母草悬浮培养细胞生长的影响 李学栋 ，龚真才 ，马 勇 ，何 平 ，杨 (1．西华师范大学生命科学学院，四川南充 637002； 2．四川省大竹中学，四川 3．内江第六中学，四川 内江 641000) 摘 要：测定了不同的基本培养基，不同的激素水平，不同的糖含量以及不同的初始接人量对益母草悬浮培养细 胞生长的影响．结果发现MS培养基最益于悬浮培养细胞的生长，3％的蔗糖水平细胞的生物量增长率最大．在初始 接人量为6 g／L时细胞增殖最快，在低接人量的情况下细胞停止生长．在6一BA无论与2，4一D组合还是与NAA 组合，均在细胞分裂素2 mg／L和生长素0．5 mg／L时悬浮培养细胞的增殖率达到最大．研究结果为细胞培养生产 益母草生物碱提供参考依据． 关键词：益母草；悬浮培养；培养条件 中图分类号：Q28 文献标识码：B 1 前 言 益母草为唇形花科一年生、二年生或多年生直立草本，气微，味微苦．具活血调经，利尿消肿作用，用于月 经不调，痛经，经闭，恶霸不尽，水肿尿少；急性肾炎水肿…． 益母草中生物碱的主要成分是水苏碱和益母草碱．益母草碱中的胍基结构具有抗血小板凝聚作用 ． 军姗 水苏碱具有提高冠状动脉和心肌营养性血流量、减少心肌细胞坏死量、降低血管阻力、改善微循环、减慢心 率、减少心输出量等作用 ；水苏碱还能抑制乳腺癌和子宫肌腺病发生，以及具有祛痰、镇咳、松弛支气管平 ∞ 滑肌的作用 ．水苏碱含量约在0．1％一0．2％，益母草碱在生药中含量很低，约在0．01％一0．05％之间． 自从1956年，Routine和Nickel首次提出用植物细胞培养技术生产有用次级代谢产物以来，据不完全统 计应用于植物细胞培养技术生产次生代谢产物的植物已达百种以上 ． 根据传统的提取工艺益母草中生物碱的含量只有0．4％，水苏碱的提取率就更低，有必要利用细胞工程 手段提高生物碱的含量．而利用细胞培养的手段来生产次生代谢物已经在很多的植物中获得成功，本实验的 目的在于通过益母草愈伤组织的诱导和建立悬浮培养体系为细胞培养生产益母草生物碱提供参考依据． 2 实验材料及方法 2．1 悬浮系的建立 益母草(Leonurus heterophyllus Sw．)种子放入湿润的培养皿中，30~C放置48 h，25 cI=培养7d，取生长旺盛 的幼苗0．1％升汞消毒7 min，75％酒精浸泡10 S，无菌水洗净，将子叶和胚轴分别切成5—6 mm的小段，愈 伤组织诱导培养基为MS 培养基，添加0．5mg／L 2，4一D和2mg／L 6一BA，含3％的蔗糖，0．6％的琼脂，调 节pH值到5．8．MS培养基经高温高压(121℃，0．15 MPa)灭菌15 min，培养条件为温度(25±1)℃，光照条 件1 500—2 000 lx，光照时间12 h． 愈伤组织在添加0．5mg／L 2，4一D和2 mg／L 6一BA的MS培养基中经过3次继代后，选取状态疏松，生 长速度快的愈伤转入到液体培养基中，培养光照和时间同愈伤组织的诱导条件，摇床转速120r／min培养． 收稿日期：2008一O2一lO 基金项目：四川省重点学科建设项目(SZD0420) 作者简介：李学栋(1983一)，男，河南邓州人，西华师范大学生命科学学院生物技术专业2003级学生． 通讯作者：杨 军(1973一)，男，重庆忠县人，西华师范大学生命科学学院副研究员，博士，主要从事植物生物技术研究 第29卷第2期 李学栋，等：不同培养条件对益母草悬浮培养细胞生长的影响 137 20d后用400目筛过滤测定生物量增长率． 初始接入量=接入后称定重量一接入前称定重量．