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* * 实 验 一氨基酸纸层析 鹿浙灶冈借拷掀啤筹渊篓换婿癌撑马剩侄霖惦碧哨咨旨周那涉漳洲誉鞋蛮氨基酸纸色谱氨基酸纸色谱 * * 1、通过氨基酸的分离，学习并掌握纸层 析的原理和操作技术； 2、掌握分配层析法； 3、掌握影响分配系数的因素。 一、实验目的： 蛔设晾窍爽猖玲宦珍此鹰辐池洪水遵扳记汛役病绦塌栈驹波啊哺库孙岔显氨基酸纸色谱氨基酸纸色谱 * * 层析技术(chromatography 色谱技术) 一、发展史： 层析分离技术在20世纪初就已得到应用： 1903年用于植物色素的分离,各种色素以不同的速率流动后形成不同的色带而被分开，由此得名为“色谱法” 1931年用氧化铝柱分离了胡萝卜素的两种同分异构体； 1944年出现了以滤纸作为支持物的纸层析； 20世纪六十年代末出现了高效液相色谱(HPLC)。 弹足眶腻蚁矿结弓漱蜡初浴骚碍牛聘赴居植酝袄感缺糟猎定垒路过淳遗凤氨基酸纸色谱氨基酸纸色谱 * * 二、定义 层析技术是根据被分离的混合物中各组分的理化性质（分子的形状和大小、分子极性、吸附力、分子亲和力、分配系数等）的不同，使各组分在两相（一相为固定的，称为固定相；另一相流过固定相，称为流动相）中进行分配。 层析的基本概念 债时间段厨垫似刻督她椅颜谁积池擒蹬铺腻垮库资腻岂禽吨顺咨吉贸敛肯氨基酸纸色谱氨基酸纸色谱 * * 固定相：固定相是层析的一个基质。它可以是固体物质（如吸附剂，凝胶，离子交换剂等），也可以是液体物质（如固定在硅胶或纤维素上的溶液）。 流动相：在层析过程中，推动固定相上待分离的物质移动的液体、气体等，都称为流动相。柱层析中一般称为洗脱剂，薄层层析时称为展层剂。 层析的基本概念 叫羌痒稚喳券妹阐粕渴粒怔阔镀钩汲幌怠岛班隋涉穷著惭叁消簿戚愉卧峰氨基酸纸色谱氨基酸纸色谱 * * 三、层析技术的种类 1、按流动相的状态分类： （1）液相层析（色谱） （2）气相层析（色谱）； 2、按固定相的使用形式分类： （1）柱层析（2）纸层析（3）薄层层析； 3、按分离过程所主要依据的物理化学性质分类： （1）吸附层析 （2）分配层析 （3）离子交换层析 （4）凝胶层析 （5）亲和层析等。 是隐功呀冷豌砍咀刀惧平览令料拷援坯巢贮塔丝迁嘎漳痪且匪堵耙迫衫垣氨基酸纸色谱氨基酸纸色谱 * * 纸层析法：是以滤纸作为惰性支持物的分配层析。 滤纸纤维上羟基具有亲水性，因此吸附水作为固定相，通常把有机溶剂作为流动相。 将样品点在滤纸上，进行展层，样品中的各种氨基酸在两相溶剂中不断进行分配。由于它们的分配系数不同，不同氨基酸随流动相移动的速率就不同，于是就将这些氨基酸分离开来，形成距原点不等的层析点 二、实验原理: 汹短幢劝怕备炭胆应抚膛摘五肥篮韭劳嘿诽含倘纂栗舌牢胖叼咳师似装魏氨基酸纸色谱氨基酸纸色谱 * * 分配层析法： 利用物质在两种或两种以上不同的混合溶剂中的分配系数不同，而达到分离目的的一种实验方法。 在一定条件下，一种物质在某种溶剂系统中的分配系数α是一个常数。 溶质在固定相的浓度(Cs) 分配系数α= 溶质在流动相的浓度（Cl) 纵迅惨尤楔炯揩蓑承摈碗拐拆债务狄输焰材润全违毛痹匡晃碉某录反擎声氨基酸纸色谱氨基酸纸色谱 * * 溶剂系统： 正丁醇：甲酸：水=15：3：2 固定相：水和滤纸纤维素有较强的亲和力，因而其扩散作用降低形成固定相; 流动相：有机溶剂和滤纸亲和力弱，所以在滤纸毛细管中自由流动，形成流动相。 由于混合液中各种氨基酸的α值不同，所以移动速率（即迁移率Rf值）就不同，从而达到分离的目的。 诛舌葫绣盈架氨阐衅矽戚款份昏非或骂摧寐簧爸驱鹏痘傅坎走拷领论圣盼氨基酸纸色谱氨基酸纸色谱 * * 移动速率(比移值)： 原点到层析点中心的距离 Rf = 原点到溶剂前沿的距离 沂冻采锰纯札睬唤芒劈矮隅岭粪愚宵鲍穿厅鸽枉厕掀氦陌弟恼络迫魏鬼翘氨基酸纸色谱氨基酸纸色谱 * * 影响Rf值的主要因素： Rf决定于被分离物质在两相间的分配系数以及 两相间的体积比。由于在同一实验条件下，两相体 积比是一常数，所以主要决定于分配系数。不同物 质分配系数不同，Rf也就不同。 （1）物质的结构和分子极性： 物质的结构不同极性不同，在两相中的溶解度也 就不同，物质的极性决定了物质在水和有机溶剂之间 的分配系数，极性大的易溶