血管内皮生长因子在急性白血病中表达的分析.pdfVIP

中文摘要 前 言 ／血管新生在实体肿瘤的生长、浸润及转移的过程中起着至关 重要韵作用。最近发现血液系统恶性肿瘤中也存在血管新生现 leukemia，AML)、 象，如急性非淋巴细胞性白血病(Acutemyeloid 急性淋巴细胞性白血病(Acute leuI【emia，ALL)、多发 lymphocytic 性骨髓瘤(Multiplemyeloma，MM)等。 endothelium factor， 血管内皮生长因子(VasculaLr growth VEGF)是最重要的促进血管生成的因子之一，具有增加血管通透 性、促进内皮细胞移行和增殖等作用。一个体外细胞培养实验证 实一些恶性血液病细胞系表达VEGF及其受体，Fiedhr等还发现 初诊AML患者外周血或骨髓单个核细胞VEGF表达量比正常骨 髓细胞及富含CD34+细胞明显高毋本实验应用免疫细胞化学及 流式细胞术的方法检测了初诊急佳白血病患者骨髓或外周血单个 核细胞VEGF蛋白的表达情况，以明确急性白血病细胞是否高表 达VEGF，以及VEGF在急性白血病发病过程中是否起重要作用。 ， ／材料和方法 L、 一、临床资料 31例，ALL28例，诊断 初诊急性白血病患者59例，其中AML 做对照组。 二、外周血或骨髓单个核细胞分离 3—5ml肝素抗凝的外周血或骨髓，应用密度梯度离心法分离 单个核细胞，所得细胞中白血病细胞比例大于90％。 三、免疫细胞化学方法检测VEGF表达 ．1· 离心涂片枧作缨照涂片，～∞℃保存，采用SAP方法检测。 保存的缨胞涂片玲孬嗣鼹定lO分钟，如羊盘漶室湿封闭30分钟， 然麓加入∞心兔抗人V嚣GF多抗(1：100)37℃孵育2小时，再依 次鸯鼙入生物素亿羊撬兔二抗翻SAP复合物37℃孵育30分铮，坚 固红显色5一10分钟，苏本素复染2分钟。以PBS代替一撬终熙 性对照。光学显微镜下观察计数帑性纲骢数。纲胞浆染成淡粉色 至深蕴色酶秀鼯性缨艟，阳性缨施数大手∞％判定势疆性。 西、流式缵稳米方法检测VEGF表达量 对其中30铡白斑病标本和9镶对照组标本应耀流式细憨术 方法检测VEGF豹表达量。分离酶单个棱缨胞，70％冷乙醇匿定， 一20℃保存。检测时4℃离心弃乙醇，PBS洗两次，l％小牛盘渍 封闭弼分锌，加入兔抗入VEGF多抗(终浓度l：100)塞温孵寅2 小时，PBS洗两次后褥加入疆％标记的羊抗兔二扰(终浓度1： 100)室温避光孵育30分事＆PBS洗两次，重新悬浮缅脆，上槐检 fluo- 测。以PBS代替一抗作阴性对照。以平均荧光强度(Mean le$ceIlCe intensity，MFI)表示VEGF的表达量： MFI=加一抗细胞的荧光强度一阴性对照纲耱的荧光强度。 五、流式细脆术进行细施髑期分析 70％冷乙醇固定的细胞4。C离心弃乙醇，PBS洗两次；掇入 0．5 酶，冷PBS浼两次；加入含碘化丙啶(终浓度10p∥蕊)的PBS m1．4℃避光染色30分钟；离心弃染液，PBS羹新悬浮细胞，上槐检 index，PU表示细脆的增殪状态： 测。以增殖指数(Proliferat