血管内皮生长因子基因治疗新生鼠缺氧缺血性脑损伤的实验分析.pdfVIP

血管内皮生长因子基因治疗新生鼠缺氧缺血性 脑损伤的实验研究 硕士研究生：冀红 指导教师：徐立新 教授 指导小组：曲云霞 教授 专业名称：儿科学 摘 要 目的：新生儿缺氧缺血性脑病(Hypoxic．ischemicmE)是新 enc叩halop甜1y 生儿的常见疾病，其病情重，病死率高，并可产生永久性神经功能障碍。缺氧缺 血是H正发生的本质。改善新生儿脑缺氡，减轻脑损伤，对礤E的预后具有重要 意义。血管内皮生长因子(vasctllar factorⅥ零)，作用于血管内皮细胞VEGFR，通过细瞧内 透因子(Vascul缸仙}a面q 信号传导系统，最终导致血管内度细胞的增殖，迁移及诱导血管生成，同时vEGF 具有减少神经绍胞碾亡，神经保护等生物学作舄。本实验根据VEGF的这些生物 活性，将负载有鼠vEGFl20cDNA的真核表达质粒pCDNA3．1注射至新生鼠缺氧 bram 缺血脑损伤局部。探讨VEGF对新生鼠缺氧缺血性脑损伤(Hypoxic—ischemic damage如BD)的治疗作用。 方法：一、构建真核表达载体PCDNA3．1／rVEGfl20。二、通过结扎左颈总动 脉，吸入8％氧气制备左脑HmD的新生鼠模型。三、将48只7日龄sD大鼠随机 分为两组：(一)、对照组制备H毋D后，即刻通过前囟注射空载质粒100p∥只， 回笼喂养7天；(二)、治疗组，制各H皿D模型后，即刻通过前囟注射载有 rvEGFl20基因的质粒100斗g／只，回笼喂养7天。在规定时间内，断头处死，即刻 取出大脑．每组各取6例。三、免疫组化脑组织在经4％甲醛固定后，常规石蜡 包埋．应用LsAB法检测vEGF蛋白的表达情况。四、蛋白点杂交取新鲜脑组织， 提取总蛋白，用点杂交仪加样后。测定VEGF蛋白的表达情况。五、流式细胞仪将 脑组织制成单细胞悬液后，上机检测脑细胞的凋亡情况。 结果：免疫组化及蛋白点杂交结果示：治疗组VEGF蛋白表达明显高于对照 组(灰度分析Po．05)。免疫组化示：VEGF高表达于缺血大脑皮质，海马的神经 细胞，胶质细胞．及血管内皮细胞(PO，05)。流式细胞仪结果示：治疗组的脑细 胞凋亡率明显低于对照组(P0．05)。 结论：一、脑内注射外源性vEGF基因，在大脑皮质及海马处神经细胞．神 经胶质细胞及血管内皮细胞胞浆中高度表达。二、外源性的VEG墨可以减少赔细 胞的凋亡。本实验的研究为衄D的治疗提供一条新的探索途径。 关键词：新生鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)血管内皮生长因子(VEGF) DirectGene ofNakedDNA Vascular Transfbr Encoding FactOrinto Ischemia endOthelialGrOwth Hypoxia Of Rat BrainNewborn Damage HoⅡg Postgraduate：Ji Director：Prof-XuLix‘m Director Yunxia Qu group：Prof ABSTRACT i