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Research Paper 研究报告 微生物学报 A cta M icrobiolog ica Sinica 53 (3 ) :259 － 268 ; 4 March 20 13 ISSN 000 1 － 6209 ; CN 11 － 1995 / Q http :/ / journals． im ． ac ． cn / actamicrocn 重组大肠杆菌表达铜绿假单胞 菌溶血性磷脂酶 C * ， ， ， ， 赵金星 张梁 顾 正华 丁重 阳 石贵 阳 ， ， ， ， 江南大学 食品科学与技术国家重点实验室 工业生物技术教育部重点实验室 粮 食发 酵 工 艺 与技术国家工程实验室 无锡 2 14 122 : 【 】 C (Hemolytic Phospholipase C ，PLCH ) (Escherich coli) 摘要 目的 构建产 溶 血 性 磷 脂酶 的重组大肠杆 菌 菌 ， 。 【 】 C (Phospholipase 株 并初 步优 化其 发酵 条件 方法 首 先 利 用 卵 黄 硼 砂 平 板 分 离 法 筛 选 到一 株 产 磷 脂酶 C ，PLC) ， (Pseudomonas aerug inosa ) 4 1 ; P ． aerug inosa 4 1 活性较 高的菌株 命 名 为铜绿假 单胞菌 进一 步 以 基因 DNA ，PCR C (PLCH) ， 组 为模 板 设计 引物 扩 增获得溶血 性磷 脂酶 基因 构建 重组大肠杆 菌表达质粒 并转化大 E ． coli BL2 1 (DE3 ) ; PLC ， 。 【 】 肠杆 菌 筛选 转化子 并检 测 活性和 溶血能力 并初 步优 化其 发酵 条件 结果 成 功 构 E ． coli BL2 1 (DE3 ) / pET28a-plcH ; PLC ， 建 了重组大肠杆 菌 在硼 砂 卵黄平 板上对重组 菌进行 活 性 测 定 显 C ; ， PLCH 示重组菌有 明显 的磷 脂酶 活性 在 哥伦 比亚血 琼脂平 板上对重组 菌进行 溶血 性试