甘蓝型油菜温敏gmste5a幼蕾酵母双杂交cdna文库的构建及筛选.pdf

中国油料作物学报 ２０１６，３８（３）：２９２－２９９ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＯｉｌＣｒｏｐＳｃｉｅｎｃｅｓ ｄｏｉ：１０．７５０５／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－９０８４．２０１６．０３．００４ 甘蓝型油菜温敏 ＧＭＳＴＥ５Ａ幼蕾酵母 双杂交 ｃＤＮＡ文库的构建及筛选 １，２ １ １ １ １ 李可琪 ，王莎莎 ，曾新华 ，闫晓红 ，吴　刚 （１．中国农业科学院油料作物研究所，农业部油料作物生物学与遗传育种重点实验室，湖北 武汉，４３００６２； ２．中国农业科学院研究生院，北京，１０００８１） 　　摘要：为进一步解析甘蓝型油菜温敏细胞核雄性不育系（ＧＭＳ）ＴＥ５Ａ的不育机理，筛选与育性蛋白ＢｎａＡ．ｔｓＭｓ 互作的重要蛋白。提取不育系ＴＥ５Ａ的幼蕾（直径 ２ｍｍ）总ＲＮＡ，利用ＳＭＡＲＴ（ｓｗｉｔｃｈｉｎｇｍｅｃｈａｎｉｓｍａｔ５′ｅｎｄｏｆ ≤ ｔｈｅＲＮＡｔｒａｎｓｃｒｉｐｔ）技术构建酵母双杂交ｃＤＮＡ文库和诱饵载体ｐＧＢＫＴ７－ＢｎａＡ．ｔｓＭｓ，转化酵母菌株Ｙ２Ｈｇｏｌｄ，检 测其毒性和自激活活性，通过Ｍａｔｉｎｇ方法筛选与蛋白ＢｎａＡ．ｔｓＭｓ互作的蛋白，并根据基因注释推测其功能。结果 ７ 成功地构建了甘蓝型油菜温敏细胞核雄性不育系ＴＥ５Ａ幼蕾酵母双杂交ｃＤＮＡ文库，文库库容量为２×１０ｃｆｕ，重 组率达到１００％，插入片段平均长度大于１．８ｋｂ。发现诱饵载体ｐＧＢＫＴ７－ＢｎａＡ．ｔｓＭｓ对酵母没有毒性，没有自激活 活性。筛选出４９个候选互作蛋白，其中有丝分裂纺锤体检测点蛋白（ＢＵＢＲ１）、周期蛋白Ｄ３（ｃｙｃｌｉｎ－Ｄ３）和Ｆ－ｂｏｘ 蛋白（ＦＢＷ２）三个互作蛋白可能与该不育蛋白相互作用，共同调控该不育系ＴＥ５Ａ的育性。 关键词：甘蓝型油菜；温敏细胞核雄性不育；酵母双杂交ｃＤＮＡ文库；ＢｎａＡ．ｔｓＭｓ；互作蛋白 中图分类号：Ｓ５６５．４０３　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００７－９０８４（２０１６）０３－０２９２－０８ Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆｙｅａｓｔｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙｏｆｆｌｏｗｅｒｂｕｄ ｆｒｏｍａｄｏｍｉｎａｎｔｔｈｅｒｍｏ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｇｅｎｉｃｍａｌｅｓｔｅｒｉｌｅｌｉｎｅＴＥ５ＡｉｎＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓ １，２ １ １ １ １ ＬＩＫｅ－ｑｉ ，ＷＡＮＧＳｈａ－ｓｈａ，ＺＥＮＧＸｉｎ－ｈｕａ，ＹＡＮＸｉａｏ－ｈｏｎｇ，ＷＵＧａｎｇ （１．ＯｉｌＣｒｏｐｓＲｅｓｅａｒｃｈＩｎｓｔｉｔｕｔｅ，ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＧｅｎｅｔｉｃＩｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｏｆＯｉｌＣｒｏｐｓ， ｔｈｅＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，Ｗｕｈａｎ４３００６２，Ｃｈｉｎａ； ２．ＧｒａｄｕａｔｅＳｃｈｏｏｌｏｆＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｏｒｅｖｅａｌｓｔｅｒｉｌｉｔｙｍｅｃｈａｎｉｓｍｏｆａｄｏｍｉｎａｎｔｔｈｅｒｍｏ－ｓｅｎｓｉｔｉｖｅｇｅｎｉｃｍａｌｅｓｔｅｒｉｌｅｌｉｎｅＴＥ５ＡｉｎＢｒａｓ ｓｉｃａｎａｐｕｓ，ｈｏｓｔｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｗｉｔｈＢｎａＡ．ｔｓＭｓｐｒｏｔｅｉｎｗｅｒｅｓｃｒｅｅｎｅｄ．Ｓｔｅｒｉｌｅｆｌｏｗｅｒｂｕｄｓ（ｄｉａｍｅｔｅｒ ２