黑胸大蠊浓核病毒ns2 蛋白的表达、 抗体制备及亚细胞定位.pdfVIP

微生物学通报 SEP 20, 2009, 36(9): 1443~1448 Microbiology © 2009 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 主编点评文章 黑胸大蠊浓核病毒 NS2 蛋白的表达、 抗体制备及亚细胞定位 1, 2* 2* 2 2 1 1 2 2** 杨 波 余沛然 蔡大威 董晓敏 刘志刚 胡 征 张珈敏 胡远扬 (1. 430068) (2. 430072) 摘 要: ns2 是黑胸大蠊浓核病毒的一个非结构基因, 所编码的蛋白质大小为30 kD, 是一个功能 未知的基因。为了对该基因进行深入的功能研究, 从感染了黑胸大蠊浓核病毒的蟑螂的后肠组织 中通过 RT-PCR 得到 ns2 基因编码序列, 将其构建于原核表达载体 pET-28a, 转化大肠杆菌 BL21(DE3) 获得融合表达产物。此融合蛋白经分离纯化后, 免疫新西兰大白兔, 制备其多克隆抗 体。采用 Western 印迹技术, 用该抗体检测 ns2 基因的真核表达产物, 证明该抗体有较好的针对 NS2 蛋白的专一性, 可用于对NS2 结构和功能的研究。同时, 将此编码序列克隆至果蝇细胞表达 载体pAC, 得到重组质粒后转染果蝇S2 细胞表达重组蛋白, 通过共聚焦显微镜用该抗体检测该蛋 白在S2 细胞中的亚细胞定位, 发现NS2 蛋白主要定位于细胞质, 核内仅有少量分布。 关键词: 黑胸大蠊浓核病毒, NS2 蛋白, 表达, 亚细胞定位 Expression, Purification, Preparation of Polyclonal Antibody and Subcelluar Localization of the NS2 Protein of Periplaneta fuliginosa Densovirus YANG Bo1,2* YU Pei-Ran2* CAI Da-Wei2 DONG Xiao-Min2 LIU Zhi-Gang1 HU Zheng1 ZHANG Jia-Min2 HU Yuan-Yang2** (1. Department of Biotechnology, Hubei University of Technology, Wuhan, Hubei 430068, China) (2. State Key Laboratory of Virology, Wuhan University, Wuhan, Hubei 430072, China) Abstract: NS2 is a nonstructural protein of Periplaneta fuliginosa densovirus (PfDNV) with a molecular mass of 30 kD, whose function is not yet clearly understood. In order to study the expression, subcellular distribution and t