副肌球蛋白在螯虾（procambarus clarkii）腹屈肌pdf.pdfVIP

维普资讯 第 J2卷 第 3期 云南师范大学学报 V0}．12 N03 1992年 9月 JournalOfYunnan NormalUnivers—W SeO 1992 ④ 副肌球蛋白在螯虾 (Procambarusclarkii) cl一 口 腹屈肌粗肌丝上的定位 周念辉 王宝华 陈 明 2 (云南师太生物系) (中科院上海生理研究所) 摘 要 用选择性抽提和免疫细胞化学方法 ，追踪副肌球蛋 白在螯虾腹屈粗肌丝上 的定 位．用能溶解肌球蛋 白但不溶解副肌球蛋 白的溶液 (300mM KCI，pH6．0)处理分离的粗 肌丝，2o分种后，可以见到粗肌丝中央部分只剩下直径 6rim 的蛋白丝．利用荧光抗体间 接染色法，可见抗副肌球蛋 白抗体附着于毽条 A带．这些结果提示整吓腹屈肌瓤肌丝由 副肌球蛋 白内芯和位于其上的肌球蛋 白构成，副肌球蛋 白贯穿整条粗肌丝，肌球蛋 白则仅 在粗肌丝表面的某些位点上包住副肌球蛋 白．至于那些无肌球蛋 白覆盖的部位，副肌球蛋 白则是裸露的．租肌丝的不同横切面显示它有实心和空心两种结构，这又提示螯虾粗肌丝 除肌辣蛋 白和捌肌球蛋白外，在 中心尚可能还存在另一结构． 美键词型坠苎曼皇 ! 肌球蛋白墨 爿蔓屈肌 脊椎动物横纹肌肌原纤维由粗肌丝和细肌丝构成，横纹肌的收缩符台肌丝滑行模型． 节肢动物也有发达的横纹肌，但其超微结构、收缩蛋白和收缩活动的调节机制与脊椎动物 横纹肌有许多不同之点．侧如，当横纹肌肌小节长度改变时，A带的长度则发生相应 的 变化．分离的掘肌丝长度不同_lj．掘肌丝除含有肌球蛋 白外，还含有脊椎动物横纹肌粗肌 丝不具有的剐肌球蛋 白 3】．节肢动物横纹肌的收缩和调节蛋 白质的化学性质与脊椎动物 横纹肌存在一些差异 棚。在收缩活动的 ca 一调节方式上，节肢动物不仅有肌动蛋 白调 节，还存在肌球蛋白调节 【日。因此，脊椎动物横纹肌的肌丝措行模型并不完全适用于节 ● 肢动物横纹肌．粗肌丝 的蛋白质组成及其装配是深入认识肌肉收缩机制及钙离子调节作用 的重要环节．我们曾经报道螯虾腹屈肌掘肌丝 由肌球蛋白和副肌球蛋白组成 。为了继续 深化对肌 肉收缩及其调节机制的认识．车工作用选择性抽提和免疫细胞的化学方法，追踪 剐肌球蛋 白在螯虾腹屈肌粗丝上的定位． 1 材料和方法 ， 螯虾属节肢动物门、甲壳纲。车实验所用螯虾均购 自上海市农贸市场，静放清水中喂 养． ·1992-03-25收稿 国家 自然科学基金资助项 目 维普资讯 94 云南师范大学学报(自然科学版) 第 l2卷 l_l KC1溶液处理的粗肌丝 中镜样品的制备 取螯虾 深 部腹 屈肌 ，加 入 lO倍 体 积 含 50mM KCI，5mMMgCh， tmMNaN ， 10mM EGTA ．-10mM ．SME．~lOmM 磷酸钠缓冲液 (pH7．0)的溶液．匀浆，tO000rpm 离心 t0分钟．除去上清液，反复洗涤三次。沉淀加入含 5mMATP的上述溶液，匀浆 后，10000wm 离心 10分钟．即可得粗，细肌丝分离的悬浮液。(上述过程在 4℃下进 行)． (a)对照组：将 上 面 制备的悬 浮液滴 于 Formvar碳 膜的标 本栅 上．在