利用响应面法优化L-组氨酸摇瓶发酵培养基.pdfVIP

氨基酸和生物资源 2008，30(2)：23～26 Amino Acids＆Blotic Resources 利用响应面法优化L一组氨酸摇瓶发酵培养基 宋 佳 ，刘建成 ，娄 恺 (1．石河子大学食品学院，新疆石河子832003；2．新疆农科院微生物应用研究所，新疆乌鲁木齐830091) 摘要：通过单因素实验对L一组氨酸产生菌LGS4的发酵培养基成分进行筛选，确定了3个影响较大的重要因素，即酵母 膏、尿素、硫酸镁。在此基础上，采用二次响应面分析法进行回归分析，得到各因素的最佳水平值。经5批培养验证，预测值与 验证试验平均值接近。优化后培养基组成为(g·L )：蔗糖150，硫酸铵50，酵母膏10，尿素1．2，MgSO 2．2，KH：PO 1．5， K2HPO 0．5，Na：HPO 0．5。优化后的发酵培养基使LGS4菌株的L一组氨酸产量提高了15．25％。 关键词：L一组氨酸；发酵；优化；响应面法 中图分类号：Q503 文献标识码：A 文章编号：1006—8376(2008)02—0023—04 L一组氨酸是含咪唑核的碱性氨基酸，是人体 1．2．3基础发酵培养基(g·L )：蔗糖 150， 和动物体内的半必需氨基酸，具有多种生理功能，广 (NH )2SO 40，酵母膏20，尿素2．0，MgSO4·7H2O 泛用于医药、饲料、保健及食品行业 。目前，L一 1．0，KH2PO4 1．5，K2HPO4 0．5，Na2HPO4 0．5 ，Ca- 组氨酸的市场需求很大，价格较高。国内仅有少量 CO3 30。 生产，近年来已有多家单位开展发酵生产组氨酸的 1．3 培养方法 研究活动，但由于产酸率较低，尚无法运用于实际生 1．3．1种子培养用无菌水将生长良好的斜面接入 产。因此，加快研究发酵生产组氨酸已迫在眉睫。 装有30 mL种子培养基的500 mL三角瓶中，30℃， 响应面分析法是20世纪中后叶发展起来的优 240 r·rain 旋转式摇床振荡培养18 h。 化试验条件统计学方法，在微生物培养条件优化中 1．3．2摇瓶发酵接1 mL种子液于装有14 mL发酵 已有广泛应用 I3 J。本研究在对黄色短杆菌LGS4 培养基的500 mL三角瓶中，30℃ ，240 r·rain 旋 产组氨酸发酵培养基组成单因素的考察基础上，运 转式摇床振荡培养72 h。 用Design expo~软件采用响应面分析法对筛选出的 1．4 分析方法 3个重要因素的最佳水平及其交互作用进行探讨和 1．4．1 pH测定 国产精密pH试纸及精密pH计 研究 。 (Sacaofius PB一10)测定。 1．4．2菌体生长量测定取0．4 mL待测液用2 tool· 1 材料与方法 L 盐酸稀释20倍，摇匀，用UV2550型分光光度 1．1 菌株： 计，1 am光程540 nm测OD J。 黄色短杆菌LGS4(Bio。，Tha一，3一(2一Thia． 1．4．3发酵液中蔗糖测定 紫外分光光度度法测 zoy1)一L—alanine—r)由新疆农业科学院微生物所 定 。 提供。 1．4．4发酵液中组氨酸含量测定 Paully比色法测 1．2 培养基 定 。 1、2．1斜面培养基(g·L )：牛肉膏3，蛋白胨10， 1．5 实验设计 NaC1 5，琼脂20，pH 7．0～7．2 1．5．1单因素法筛选重要因素 1．2、2种子培养基(g·L )：蔗糖30，NH C1 23，酵 采用单因素实验考察了发酵培养基中的蔗糖、