延边黄牛卵母细胞激活后第二极体排出的研究.pdfVIP

AnimalHusbandry VeterinaryMedicine 2008 Vo1．40 No．8 延边黄牛卵母细胞激活后第二极体排出的研究 林 涛，李晓霞，刁云飞，祖 晶，方南洙 (延边大学农学院动物科学系，吉林 龙井 133400) 摘要：用乙醇激活不同卵龄 (22h，24h，26h，28h，30h)的延边黄牛卵母细胞，对第二极体的排出、鉴别以及核物质与第二极体位置关系 进行了研究。结果 ：(1)延边黄牛卵母细胞第二极体排出率随卵龄的增加而增多，而且激活后培养3h第二极体出现率最高。(2)第二极体的鉴 别：根据第一极体退化残留物或第一极体分裂为2个小极体来鉴别第二极体；当2个极体同时存在时，第二极体体积略小、形状不规则。(3)通 过Hoechst33342染色观察 ，核物质与第二极体几乎全部相邻。 关键词 ：延边黄牛；卵母细胞；第二极体；激活；鉴别 中图分类号：$823 文献标识码：A 文章编号：0529—5~3o(2008)08—0050—03 哺乳动物卵母细胞停滞在第2次成熟分裂中期， 最大饱和湿度的培养箱中成熟培养。 此时只有精子的进入或人工激活方式才能启动卵母细 1．3 卵母细胞激活 胞继续进行第2次成熟分裂，经第2次成熟分裂后期 成熟培养后的卵丘卵母细胞复合体 (COCS)置 到末期，排出第二极体，完成第2次成熟分裂。以前 于含有 3％透 明质酸酶的PBS中，漩涡震荡 6～7 人们认为极体是没有任何功能的染色质 ¨，未得到 min，去除卵丘细胞。 足够的重视，后来的研究表明，极体并非是无功能、 挑拣形态正常、细胞质均匀且排出第一极体的卵 退化的染色质，极体中的染色体同样具有遗传能 母细胞置于含有 7％乙醇的无血清CR1aa溶液中激活 力 J。在体细胞核移植卵母细胞去核方法中，末期 处理 5～7min。 去核法需要对第二极体进行辨认，以达到准确的去 1．4 卵母细胞的培养及第二极体的观察 核。因此，有必要研究卵母细胞第二极体的排出及其 将激活后的卵母细胞用培养液 (添加5％FBS的 鉴别方法 。 CR1aa液)冲洗3～4次后，放置培养液小滴中，于 本试验用乙醇对延边黄牛卵母细胞进行激活，培 38．5℃、5％CO 、饱和湿度的培养箱中培养2～3 养后观察第二极体排出的情况，并对第二极体进行鉴 h。观察第二极体的排出情况。 别。通过Hoechst33342染色，观察核物质与第二极 1．5 统计分析 体间的位置关系，为研究末期去核法奠定基础。 用SPSS14．0进行统计，方差分析多重比较检验 数据差异性，显著标准为P0．05。 1 材料与方法 2 结果 1．1 试剂 所用FBS购 自鼎国生物试剂公司，其他试剂均 2．1 激活不同多l9龄卵母细胞第二极体的排出情况 购 自Sigma公司。 将体外成熟培养22，24，26，28，30h的延边 1．2 卵母细胞的采集与体外成熟 黄牛卵母细胞用乙醇进行预激活5～7min，培养2～ 从延吉市屠宰场采集卵巢，置于含有青、链霉素 3h后观察第二极体的排出情况。结果表明：26，28， 的生理盐水保温杯中，4～6h内运至实验室，用 30h组间第二极体排出率差异不显著，但显著高于 38．5 的生理盐水洗净，用 16号针头从卵巢表面吸 22，24h组；22，24h组间差异不显著。从数据上 取2～8mm卵泡中的卵泡液，收集卵丘卵母细胞复 看28h组效果最