IKBKE和FYB基因单核苷酸多态性与云南汉族系统性红斑狼疮的相关性研究.docVIP

　　IKBKE和FYB基因单核苷酸多态性与云南汉族系统性红斑狼疮的相关性研究 1.绪论 1.1系统性红斑狼搭概述 系统性红斑狼痛病人由于体内具有大量致病性自身抗体和免疫复合物而造成多个系统、器官的损伤，如皮肤、关节，装膜、心脏、肾脏，中枢神经系统、血液系统等等，大约50%的SLE患者会发展成最为严重的症状，就像肾炎、大脑血管炎。SLE在女性中的发病率极高（男女比例为1: 9)，尤其好发于育龄期女性CT。SLE的发病机理是多因素的，可能受遗传和环境因素联合支配，导致免疫学自我耐受性不可逆转的损坏[5]。系统性红斑狼拖个体患者的器官系统涉及范围及远期疗效都很难预测，并且临床特征也高度差异。SLE的家族聚集现象和对同卵双生的研究提示遗传因素在SIE的发病中扮演着重要的角色，家族聚集的研究表明SLE病人的兄弟姐妹有更大的患病风险，患病率相对一般人群高出29%[6]，同样的，同卵双胞胎（患病率为30%)相对于异卵双胞胎（患病率为3%)有更高的患病率[7，8]。但由于同卵双生子的发病一致率未达到100%，也提示我们环境因素在促进系统性红斑狼掩的发生中扮演一定的角色[9]?非遗传的环境因素如病毒感染、药物、激素、精神焦虑、日光及紫外线等因素可诱发疾病的发生_，但一般认为环境因素仅是在一定的遗传背景下触发疾病的。系统性红斑狼拖是由多对微效基因与环境因素共同作用的复杂疾病，具有明显的遗传异质性、表型复杂性及种族差异性等特征[]。SLE在亚洲人群中的发病率远远高于欧洲人群，而在中国人群中的发病率又高于日本等其他亚洲国家。系统性红斑狼疫可造成多系统的损害，其中狼掩肾炎(Lupus nephritis,LN)是.最严重的并发症之一[12]，累积发病率亚洲人群最高（约为55%)，非洲人群次之(51%),其他各洲相对低些。迄今为止，系统性红斑狼拖仍缺乏有效治愈手段，并且近几年来其发病率呈现增高趋势，使得系统性红斑狼掩作为严重威胁人类健康的疾病之一，其发病机制亟待更深入的研究。 1.2单核苷酸多态性及其研究方法 单核苦酸多态性（Single Nucleotide Polymorphism,SNP)是指在基因组水平上由单个核若酸的变异所引起的DNA序列多样性。SNPs在人类基因组中分布广泛，是稳定的多态性位点，与单核苷酸突变不同，SNP在人群中出现频率21%，而单核苷酸突变在人群中的存在频率为0.1 %-1 %。全部人群的SNP总数可达几千万甚至更多，编码区、内含子、启动子等区域均有分布。SNPs分为转换（一种啼唆变为另一种喃唆或一种嘌呤变为另一种嘌呤）和颠换（嘌呤与啼唆之间的转变）2种。位于编码区的SNP (coding SNP, cSNP)数量较少，但对于遗传性疾病的研究具有重要意义。cSNP包括同义cSNP和非同义cSNP两种，同义SNP指DNA序列的改变，并不会对其最终所翻译出的蛋白质氨基酸序列产生影响；非同义指SNP造成碱基序列的改变，使得以其为模板最终翻译出的蛋白质氨基酸序列发生了改变，从而影响蛋白质的功能。而位于非编码区的SNP (如位于基因调控序列中的SNP)有可能通过影响转录因子的结合从而影响下游基因表达量的多少。因此这两类具有功能的SNP (非同义cSNP和可能改变基因表达量的SNP)具有显著的生物学意义，被称为功能多态性SNP。功能性SNP可造成患者对某类疾病（如系统性红斑狼掩）更加易感或对某类治疗方案更加敏感，从而使个体化医疗成为可能。 . 二 实验材料及方法 2.1主要仪器及耗材 (1)超低温冰箱（美国Harris公司） (2)冷冻离心机Centrifuge 5804R (德国 Eppendorf 公司） (3)台式离心机80-2B(上海安亭科学仪器厂） (4)电子恒温水浴锅MEMMERT p9700 PGR 扩增仪(美国 ABI 公司） (6)电泳仪(美国BIO-RAD公司） (7)电泳槽(英国HYBAID公司） (8)数码凝胶成像系统(英国SyngeneGene Ginus公司） (9)冰箱和冰柜(青岛海尔公司） (10)电子恒温箱(德国MEMMERT公司） .. 2.2样本采集 本研究共纳入了 1166例云南汉族人样本。样本均釆自昆明医学院第二附属医院，其中系统性红斑狼搭患者536例，均按照1982年美国风湿病学会（ACR)制定的诊断标准进行了确诊，并排除了类风湿性关节炎及原发性肾小球肾炎等其他免疫性疾病。正常对照人群630例，所有正常对照人群年龄、性别方面与系统性红斑狼疫组人群相匹配（见表2-1)。本研究涉及到的SLE患者和健康对照组人群均知情同意，抽取每个个体5ml静脉血，加入0.8mlACD抗凝剂摇匀保存。本研究选取的5个SNPs选取依据JohannaK Sandling等人[87]和Catarina Addobbati