中度嗜盐菌分离辨识及在环境修复之应用.docVIP

　　中度嗜盐菌分离辨识及在环境修复之应用 第1章绪论 1.1中度嗜盐菌概述 1. 1. 1嗜盐菌的分类 近年来，嗜盐菌的研究日益受到重视，与其相关的研究也越来越广泛和深入。嗜盐菌存在于多种盐环境中，如盐湖死海、海洋等水环境；盐土环境如盐池、盐场等；除此以外，在很多盐腌制的食品中也可以发现嗜盐菌。各种盐环境的地质情况和形成过程不同，盐环境的盐浓度和离子组成也有很大的差别。在这些盐土环境中，动物和植物物种非常有限，主要以处于不同属种的微生物为主要的生命形式，如嗜盐古菌、耐盐绿藻、嗜盐和耐盐菌。根据微生物对盐浓度反应的不同，可将嗜盐菌分为不同的种（如表。 1.1.2中度嗜盐菌的组成 1919年LeFevre和Round在腌制黄瓜的盐齒中分离得到的一类能够耐受5-25%NaCl浓度、无色素的微生物，这是有关中度嗜盐菌最早的研究。1956年，Baxter和Gibbons最早使用中度嗜盐菌这一名词来描述这一类微生物。根据Kushner的定义，中度嗜盐菌是指在0.5 mol/L和2.5 mol/L盐浓度之间有最佳生长能力，依赖于cr生长的一类微生物。20世纪70年代幵始对各种高盐环境进行了广泛的研究，从中分离到了大量的巾度嗜盐菌，然ifii，由于对4 度嗜盐菌缺乏统一的认识，因此一些中度嗜盐菌被归入不同的科和屈，如一些革兰氏阴性中度嗜盐菌菌株被分到一些包含非嗜盐菌的屈。随着16SrRNA和23SrRNA基因测序技术系统分类研究的迅速发展[5]，中度嗜盐菌的分类更具系统性。根据中度嗜盐菌生理生化特征的不同进行区分，见表 1.2。 1.1.3中度嗜盐菌的栖息环境 中度嗜盐菌广泛存在于海水、沙漠等环境中，另外在很多盐腌制的食品中也发现有中度嗜盐菌。在海水、沙漠环境中的微生物可能会面对许多使其生存困难的因素，如干旱，高太阳福射，高温和极端pH条件。在同一环境中，极端嗜盐古菌和中度嗜盐菌处于不同的层次，他们只是在很小的盐浓度范围内有重叠。中度嗜盐菌在自然环境中是动态分布的，温度和营养条件对中度嗜盐菌的生长有很大的影响。一般情况下，在盐浓度较低的环境中，嗜盐菌占绝对优势；在盐浓度较高（30%以上）时，以嗜盐古菌为主；在中等盐浓度（20%~30%)情况下，温度和营养条件决定嗜盐细菌和嗜盐古菌的优势。在低温条件下，嗜盐古菌的生长速度比嗜盐细菌慢，高温时则相反；在营养缺乏条件下细菌占优势；在营养丰富时，嗜盐细菌比嗜盐古菌多（即使盐浓度达到25%)。在高盐土壤中分离的很多菌株可以在低盐度（0.5%?2.0%)下生长，这是因为盐土中的盐浓度受降水等条件的影响变动很大，例如降水、降雪等可以使盐土中的盐浓度下降非常明显，而水体中的盐浓度相对稳定。盐环境中的微生物适应着环境，同时也改造着环境。我们很难分开中度嗜盐菌与共同存在的其它微生物对环境的各自作用。目前，人们对很多高盐环境进行了比较详细的生态学研究。除了盐浓度，这些高盐环境可能还存在着其它的抑制中度嗜盐菌的因素，但是关于这方面的研究还很少。这些抑制因素可能与高盐环境中的微生物的群体规模和生态周转有关系。 1.2四氢嘧啶 因前，已经发现的渗透压补偿溶质包括：多元醇类、氨基酸类、糖类、甜菜碱类等。多元醇类的渗透伍补偿溶质主要包括山梨醇、环多醇、甘露醇和甘油等。氨基酸类的渗透补偿溶质主要包括：甘氨酸、谷氨酸、丙氨酸、谷氨酷胺和乙酰鸟氨酸等。糖类的渗透压补偿溶质主要包括：鹿糖、海藻糖和葡萄糖苷等。甜菜碱类的渗透HI补偿溶质主要包括脯氨酸甜菜碱、甘氨酸甜菜碱等。中度嗜盐菌的渗透压补偿溶质为四氢嘧啶。 第2章中度嗜盐菌分离蹄选鉴定 目前，石油、化工、医药和化肥等行业外排的废水，大多为念盐高浓度氨氮废水。目前的处理方法物理方法、化学方法和生物处理法。物理或化学方法处理高盐废水成本高、效率低并且可能会造成二次污染。传统生物法在处理低盐度废水时有很大优势，但当废水盐浓度过高时，会影响一般微生物的活性，抑制微生物的代谢作用，甚至使细胞脱水，导致微生物细胞破裂而死亡，微生物就会失去降解能力，严重影响了系统的处理效果。有效的策略和方法是利用耐盐的降解高浓度氨氮的菌株进行处理。为了进一步研究含盐高浓度氨氮废水的生物处理技术，本章研究筛选分离降解高浓度氣氮的耐盐性菌株，对高盐高浓度氨氮废水进行生物降解，并对其进行16SrDNA测序及同源性分析。氨氮标准工作液，P N=10u g/mL：吸取5.00niL氨氮标准C备液于500mL容量瓶中，稀释至刻度。临用前配置。酒石酸钾钠溶液，P=5000g/L:称取50.0g酒石酸钾钠（KNaC4H606 *H20)溶于lOOmL水中，加热煮沸以驱除氨，充分冷却后稀释至lOOmL。氢氧化钾溶液：称取KOH 15.0g溶于水，定容至50mL，备用。二氯化未和碘化钾的混合溶液（HgCl2-KI)：称取碘化钾5