牛CD9基因、TNP2基因多态化及其与公牛繁殖性能的关联分析.docVIP

　　牛CD9基因、TNP2基因多态化及其与公牛繁殖性能的关联分析 第一章文献综述 现代奶牛业的发展面临着扩大优良种群和提高品种质量等挑战，而数量的增加和质量的提高，都离不开良种选育这一关键环节。优质种公牛是现代畜牧业的核心和动力[1]。随着人工授精技术的普及，种公牛的影响越来越大，它对奶牛生产性能的贡献，高达75%到95%，因此在奶牛群体改良过程中，种公牛对遗传品质的影响不容忽视[2]。种公牛的繁殖性能受遗传、季节、饲养管理、温度等多种因素的影响，目前奶业发达国家一头优秀种公牛每年可生产冻精5万到10万剂，最高可达25万剂，而我国仅2万剂左右。因此，探索影响公牛精液品质的遗传机理，对选育高产优质种公牛具有非常重要的意义。公牛的采精量、鲜精活力、鲜精密度、冻后活力和精子畸形率是国际公认的衡量种公牛繁殖性能的关键指标。此外，公牛繁殖性能还受母牛的情期、一次受胎率、产犊间隔、输精指数和配妊时间等的影响[3]。公牛的采精量一般为38mL；鲜精活力是指新鲜精液在视野中能直线前进运动的精子比例，非前进运动的精子一般不具备与卵细胞结合并受精的能力，因此鲜精活力不应低于0.6；冻精解冻后在视野中直线运动的精子数不应低于0.35；一般鲜精密度不低于6亿/mL，若畸形率大于20%，顶体完整率低于40%，则精液应废弃[4]。公牛的精液品质受多个基因共同调控，其遗传力较低。通常，常规育种的方法对遗传力较高的性状效果较好，但对遗传力低的性状选择效果甚微[5]。近年来快速发展的分子标记辅助选择(MAS)技术，为该类性状的选择提供了一条全新的途径。奶牛分子育种是指在良种选育过程中，借助于分子标记(molecular marker)对群体进行遗传选择，从而提高奶牛繁殖性能的方法。尤其是对遗传力较低的性状（如繁殖性状)、筛选费用昂贵的性状(如抗病性)以及表型在发育早期难以测定的性状(如胴体性状和泌乳力)等，可采用分子标记辅助选择来提高育种效率[6]。研究结果显示，对于一些经济性状，通过分子育种进行选择，能够提高育种准确率，最高可达 60%[7]。早期提高奶牛繁殖性能通常采用引进新品种和提高饲养水平等方法，而采用遗传学研究精子发生相关基因，辅助选择的报道很少。近年来，分子育种技术发展迅速，其中，候选基因法就是一种寻找控制畜禽重要经济性状的有效方法[8]。目前对精液品质分子标记的筛选已取得很大进展，初步发现在猪中白细胞分化抗原 CD9、磷脂酶 C（PLCz）和环氧化酶 2（COX-2）与繁殖性能相关，且在不同的组织中表达量不同；在牛中 beta;-防御素基因 SPAG11、转铁蛋白 Tf、雄激素受体 AR 基因、过渡蛋白 TNP2、鱼精蛋白 Prm 等与精液品质相关。由于精液品质性状是由多基因控制的数量性状，还需进一步发现新的候选基因并验证其效应，为未来分子标记应用到实践中奠定理论基础[9]。 1.TNP2 基因研究进展 TNP2 是圆形精子细胞特异表达的基因。它与精子细胞中核蛋白的转型相关。精子发生中的标志性事件之一是染色质重组，即在精原细胞成熟的过程中，睾丸特异的生精细胞组蛋白变异体逐步替代体细胞中的组蛋白，在精子变态早期，转型蛋白TNP2又代替了生精细胞中的组蛋白变异体，然后鱼精蛋白 Prm 代替转型蛋白完成精子细胞核蛋白的转换[10]精子染色体重建过程中涉及的 TNP2，Prm1，Prm2 三个基因编码基本的染色体蛋白。在多个物种中，这三个基因定位在一个13-15kb 范围内，构成一个基因簇，据报道在人、牛和猪体内这三个基因紧密排列并相互作用，排列顺序是 5-PRM1-PRM2-TNP2-3。 TNP2 是一类富含精氨酸和赖氨酸的蛋白，结构分为明显的结构域，羧基端约占整个分子的三分之一，富含碱性氨基酸残基，推测很有可能是一个主要的DNA 结合区；氨基末端预测含有两个锌指结构，TNP2 优先和 CpG 序列（与启动子区相联系）结合，这种结合可能主要依靠锌指结构[11]。TNP2 在哺乳动物中保守性不强，核酸只有大约 75%的同源性，氨基酸同源性大约为 50%[12]。在精子细胞中，Prm1, Prm2 和 Tnp2 三种基因大量转录为mRNA，并且受转录后调控：基因在早期的单倍体细胞（即圆形精子）中转录为mRNA，维持大约 6 d 失活状态，直到在晚期单倍体细胞（即长形镜子）中激活翻译机制为止。之前有报道说，通过 Affymetrix 芯片可以筛选精子发生过程中差异表达的基因。结合 RT-PCR 实验结果，发现 TNP2 在小鼠睾丸中的表达具有年龄依赖性[13]。在 4 d、9 d、18 d 小鼠的睾丸组织中，TNP2 不表达，在 35 d 和 54 d 的小鼠睾丸组织中，TNP2 显著增加。所以，我们推测 TNP2 基因在小鼠精子发生过程中起着重要作用.