猪CD4基因启动子与增强子管控基因表达之此乃功能研究.docVIP

　　猪CD4基因启动子与增强子管控基因表达之此乃功能研究 第 1章 CD4 基因的结构、分布和功能 1.1CD4 基因结构麦顿等成功利用 CD4+转化的成纤维细胞中的mRNA制备了探针，从人外周血液淋巴细胞中提取到的mRNA制成的cDNA文库之中通过PCR手段分离出CD4基因的的cDNA，经Northem与Southem等印记分析实验，以及这些克隆是否能够向受体细胞转移CD4+表型细胞的能力，结果获得一个含有大小接近成熟mRNA的3kb cDNA插入片段的克隆PT 4B。基因组印记分析发现5个能同CD4 cDNA杂交的其分子量总和为33kb的片段，表明了CD4基因具有很大的长度[16]。CD4编码的全部核苷酸序列已经能够用双脱氧终止法进行测定。一个能够起始的完全相同序列 Pur NNATG Pur所包围的76位置上的甲硫氨酸密码子是最长的开放阅读框架的起始点，这一阅读框架延伸1374个核苷酸，编码一条多肽含有458个氨基酸。CD4信号肽具有23个氨基酸[17]，加工后的CD4蛋白含有435个氨基酸残基。CD4cDNA编码的55kd蛋白与免疫球蛋白超家族成员有明显的同源性，其位于细胞外侧由5个部分组成（见下图）为1个氨基末端信号序列和4个IgV样功能区。第一个V样区与 lgK 链的 V区有很高同源性，有 3 个互补决定区 (Plementarity etennining region，CDR)。剩下的3个v样区功能区与 Poly IgR的同源性最为相近[18]，其中第2和4个V样区中两个半胱氨酸之间的距离分别为28和42个氨基酸残基，第3个V样区之中没有二硫键。CD4跨膜区与MHC II类分子beta;链的跨膜区高度同源。同Ig样可变区与恒定区的这些功能区域很大程度上具有若干共同的特征，这其中包括被3个功能域中的二硫键以及特征性交替的疏水残基连接到一起的反向平行的beta;链的特征性模式[19]。CD4蛋白能够被一段氨基酸固定在膜上，这种氨基酸具有21个疏水氨基，这段序列与MHCII类蛋白beta;链的跨膜区具有同源性。细胞浆功能区域由许多荷电的极性残基组成[20]。两个供N一连寡糖加成的典型识别位(Asn-eu-hr)可能在体内被糖基化，细胞浆功能区域有3个丝氨酸具备被磷酸化的特点。 CD4和CD8的v区与免疫球蛋白v区在序列与结构上有显著的同源性，同样都是免疫球蛋白超家族的成员之一。但是CD4和CD8 N末端V样区仅仅只有28%同源性，它们之间的同源性比各自同免疫球蛋白轻链的同源性还要低[21]。这两个分子假定的受体域在序列上的高度差异，与他们识别不同的亚类细胞上不同分子的假说是一致的。在其他的研究中我们发现CD4可以与其本身或另一类Ig样分子成对结合，成为共价相连的二聚体形式[22]。虽然CD4可能以单一IG样形式存在于分子表面，但有可能通过非共价键之间的弱相互作用将其与同靶细胞表面上其他T细胞蛋白结合[23]。也可以这样说，CD4可能同靶细胞上MHc或其他Ig样分子相互作用而成对地结合，但这些假想的相互作用对CD4功能来说可能是必要的。根据研究表明，位于人CD4分子胞外区域的D1和D2结构域的某些具有正电荷氨基酸残基, 如 Ser44、Ly s69、Phe67、Ar g83、Lys74和 Gln189，能够与MHCII类分子链带负电荷的Glu残基相互连接介导CD4分子与MHCII类分子之间的结合[24]，可是这些在猪 CD4分子中的氨基酸残基并不具备保守性。 1.2CD4 分子的分布 分布于部分T淋巴细胞和胸腺细胞表面，也发现于某些B淋巴细胞、EBV转化和B细胞、单核吞噬细胞和脑细胞。在人类OKT4和Leu3 McAb可检测CD4抗。小鼠L3T4是人OKT4的类同物。 1.3CD4 分子的功能 现如今，在免疫学领域的免疫应答研究中，CD4有两个方面的功能主要表现。首先，CD4分子对很多MHCII类分子具有特异的亲和力，所以它可以作为细胞黏附分子发挥它特有的作用的[25]；其次，它是一个起到传递信号的分子，能够促使T细胞的激活。CD4在免疫系统中起调节作用[26]。CD4在很多实验中得以证实具有黏附作用。将CD4基因转染到成纤维细胞中，则使表达MHCII类分子的细胞系都可在单层成纤维细胞上成功吸附[27]；而且，T细胞要对表达MHCI类分子的抗原递呈细胞作出应答反应，在其表面必须具有CD4分子的存在[28]。由于TCR对特异抗原--MHC复合物的亲和力是广范存在的，因此当亲和力较弱时，CD4的这种吸附功能在很大程度上将起着决定性作用[29]。CD4分子在以前的研究实验中证实了具有传递信号的功能。利用抗CD4的单抗对T细胞的抑制或激活作用并不依赖于CD3分子的作用或MHC分子的作用，而是直接通过CD4进行传导[30]，利用抗