绒毛型烟草抗真菌候选基因选择和黑胫病抗性有关基因之鉴定.docVIP

　　绒毛型烟草抗真菌候选基因选择和黑胫病抗性有关基因之鉴定 第一章 前言 1.1烟草真菌病研究进展 真菌病害是烟草的主要病害之一，其中对烟草危害较大的有黑胫病、白粉病和赤星病。黑胫病自在印度首次发现以来，各地屡见报道，危害烟草种类广泛，可危害所有的栽培烟草（马国胜等，2001），且危害严重，发病率为 10%-20%，严重时高达 75%，甚至造成绝收；烟草白粉病在苗期和大田期均可发生，染病后叶片变黄，逐渐干枯死亡，而且在调制过程中病斑会进一步扩大，造成更大的经济损失；赤星病是烟叶成熟期的病害，主要危害叶片，在其上出现黄褐色斑点，直径可达 1-2cm，严重时可使整个叶片破碎而失去烘烤价值（苏德成，2005）。这些病害造成严重的烟叶产量下降和品质的降低，对烟草造成巨大的经济损失。 1.1.2 烟草真菌病害防卫反应机理 当有病原菌侵害烟草时，烟草对病原真菌的防卫反应程度表现为烟草抗病性的强弱，所以了解病原真菌与烟草之间防卫反应的分子机理是有效地控制烟草真菌病害的关键。目前为止，有关烟草真菌病害的防卫反应机理主要由以下几个方面： 1.1.2.1 细胞壁结构成分的变化 细胞壁是植物抵抗病原菌侵染的一道天然屏障，当烟草遭受外界病原菌侵染时，其结构成分会发发生相应变化。当烟草受到病原真菌的侵害时木质素含量增加，可以引起侵入点和周围细胞的木质化，抑制病原真菌的扩撒。木质素合成为苯丙氨酸，合成过程中涉及多种酶的参与，如过氧化物酶、苯丙氨酸裂解酶等，相关试验证明，苯丙氨酸（Maher et al., 1994）和过氧化物酶（Lagrimini et al., 1993）含量水平可以影响木质素的合成量。另外，其他细胞壁组成成分，如羟脯氨酸糖蛋白、多糖、甘氨酸蛋白等物质含量或结构也会发生变化，使细胞壁结构发生变化，抗性增强，从而抵御外界病原真菌的侵入。 1.1.2.2 抗菌物质的产生或激活 当烟草受到外界病原真菌侵害时，还会相应的产生一些抗菌物质来抵御病原真菌的侵害，如防御素、硫堇、类黄酮、类萜、几丁质结合肽、核糖体失活蛋白（RIP）等。防御素和硫堇都是最先在植物种子中发现的具有抗菌作用的低分子肽（Bohlmann et al., 1994；Broekaert et al., 1995）；类黄酮和类萜都是植物抗毒素类物质，对提高烟草对病原真菌抗性有一定作用（王关林等，1998；舒群芳等，1997）；几丁质结合肽已经证实具有体外抑菌活性（Broekaert et al., 1995）；核糖体失活蛋白能够水解真菌核糖体 28SrRNA 上糖苷键从而抑制真菌蛋白质的合成，首次发现核糖体失活蛋白是具有抗病毒作用，后来发现从大卖中分离纯化的核糖体失活蛋白还能够抑制真菌的生长（Lagermann et al., 1992）。经研究发现，核糖体失活蛋白对 28SrRNA 的抑制作用只表现在远缘物种上（Endo et al., 1988；Stirpe et al., 1992），对于本身亲缘关系较近的物种不抑制其生长（Davis etal., 1999）。在烟草上，将核糖体失活蛋白基因和几丁质酶基因一起倒入烟草中，获得的转基因烟草具有猝倒病抗性（Jach et al., 1991）。另外，Leah 等（Laeh et al., 1995）研究发现，核糖体失活蛋白与几丁质酶、葡聚糖酶在对病原真菌的抵抗作用上具有较强的协同作用。 1.1.2.3 病程相关蛋白的产生 当植物受到外界病原菌侵染时，植物本身会产生一系列蛋白来抵御外界的侵害，这些蛋白称之为病程相关蛋白。最早是在研究烟草花叶病毒时发现，又称为 PR 蛋白。目前已经在多种烟草细胞间隙中发现 PR 蛋白，其中比较重要的有水解酶蛋白、渗透蛋白和类甜蛋白。水解酶蛋白主要由几丁质酶和beta;-1,3-葡聚糖酶两种，主要负责催化几丁质和beta;-1,3-葡聚糖的水解，而几丁质和beta;-1,3-葡聚糖是多数病原真菌细胞壁的主要组成成分（赵蕾，1999），通过这两种酶使真菌细胞壁发生水解作用，抑制真菌的生长（Mauch et al., 1989）。将几丁质酶基因导入烟草中，烟株对白绢病和立枯病抗性得到提高（Broglie et al.,1991）。将于水稻的几丁质酶基因导入烟草中，烟株白粉病（王关林等，1998）和赤星病（方玉达等，2000）抗性得到提高。将于杆状病毒的几丁质酶基因到入烟草中，烟草植株表现为对赤星病的抗性（时焦等，1997；Shi et al., 2000）。离体条件下研究表明，烟草蛙眼病病菌对几丁质酶具有较高的敏感度（Neuhauset al., 1991）。beta;-1,3-葡聚糖酶作用结果与几丁质酶相类似，而且大量的试验表明，beta;-1,3-葡聚糖酶和几丁质酶共同存在时对真菌生长的抑制作用更好（