弓形虫新基因wx2 表位疫苗免疫小鼠的保护研究 - 生物化学与生物物理 .pdfVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2008, 35(9): 1051~1058 形虫新基因wx2 表位疫苗免疫小鼠的保护研究* ** ** 谭逵 张 琼 范久波 谢荣华 蒋立平 吴 翔 舒衡平 ( 南大学湘雅医学院寄生虫学教研室，长沙4 10078) 摘要 采用生物信息学方法对弓形虫新基因wx2 进行表位分析预测，PCR 扩增基因 编码2 个表位的片段W2b 和W2a，成 功构建新基因的单表位疫苗质粒pcDNA3-W2b 、pcDNA3-W2a 和双表位疫苗pcDNA3-W2b2a ，接种小鼠，观察表位疫苗的 免疫保护作用 将表位疫苗分别通过肌肉注射免疫小鼠，对照组注射pcDNA3 空质粒 ELISA 法检测血清IgG 抗体水平， 取脾细胞用流式细胞仪检测T 淋巴细胞亚 各组小鼠末次免疫后第4 周每只小鼠经腹腔注射弓形虫速殖子500 个，观察小 鼠的生存时间 结果显示，pcDNA3-W2a2b 双表位疫苗组小鼠血清IgG 抗体水平显著高于对照组(P 0.05)，且pcDNA3- + + W2a2b 双表位疫苗组小鼠脾细胞CD4 T 与CD8 T 淋巴细胞比值明显低于两单表位疫苗组，pcDNA3-W2a2b 双表位疫苗组小 鼠存活时间明显长于两单表位疫苗组(P 0.05) 实验结果表明，弓形虫新基因wx2 表位疫苗能够诱导小鼠产生抗弓形虫感染 保护性免疫，并且弓形虫pcDNA3-W2b2a 双表位疫苗的免疫保护性优于pcDNA3-W2b 、pcDNA3-W2a 两单表位疫苗 关键词 弓形虫，表位疫苗，重组质粒，B 细胞表位，保护力 学科分类号 R382.5 弓形虫(Toxop lasma gondii)是一种分布广泛的、 弓形虫新基因wx2 的基础上，构建成功新基因wx2 专性细胞内寄生的机会致病性原虫，孕妇感染弓形 的表位疫苗质粒，并且观察表位疫苗在小鼠中的免 虫，可影响胎儿的发育，严重者导致畸胎、死胎， 疫保护性，现报告如下 存活者也常有畸形及智力发育不全等后遗症，弓形 1 材料与方法 虫也是导致艾滋病患者、器官移植及恶性肿瘤患者 等免疫功能受损或抑制者发生致死性病变的主要病 1 1 材料 [1] 试剂 质粒小量提取试剂盒，标准分子质量 原体之一 由于药物防治仍存在许多问题，探索 1 1 1 安全有效的防治疫苗是当务之急 弓形虫疫苗先后 DNA marker 为天根生化公司产品；胶回收试剂盒 有减毒活疫苗、基因工程疫苗，但效果欠佳 目前 为OMEGA 公司产品；RNAase A 为Sigma 公司产 品；限制性内切酶 H 、 R 、 R 、 被称之为第三代的核酸疫苗已有报道，大多数作者 Bam Eco Eco 吁 选用的是编码弓形虫表位抗原、棒状体蛋白的基 Not 均购自Fermentas 公司；Taq 酶及T4DNA 连 因，此类基因疫苗具有一定的保护效果，但仍不理 接酶购自上海生物工程公司；HRP 标记的兔抗小 想 表位疫苗是一个新的发展趋势，它直接将蛋白 鼠IgG 购自晶美公司 质的免疫功能部分(抗原决定簇)制备成疫苗，即 1 1 2 菌株与质粒 大肠杆菌DH5琢为本室保存， [2] 用基因重组技术将一个或者多个抗原表位的编码基 7C3-C3Blue script 质粒 ，真核表达载体pcDNA3 因连接在一起，以提高疫苗的免疫效