降低大脑皮层育过程中金属蛋白酶ADAM17的表达对于神经元的向外迁移有抑制作用.pdfVIP

指 导 小组 成 员名 单 郑煌 芳 副教授 目录 摘 要 .… ，… … A B S T RA C T … 英 文 缩 略词 … … 第 一章 引言 … … 第 二章 材料和方法 … … 12 2. 1 菌 株 、质 粒 和 细胞 系 … … 12 2.2 实验动 物及 组织样 本 … … 12 2.3 培 养基 ········… … 12 2.4 试 剂及 仪 器 … … ，… … 12 2.5 小 鼠胚 胎 大脑 皮层 组织 免疫共 沉 淀 … … 12 2 . 6 W ESTERN B LOT . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . … … 13 2.7 细 胞 免疫组化 实验 … … ，… … 13 2.8 工UE 子 宫 内电转 … … 13 2.9 、小 鼠大脑皮层 免疫 组化 … … 13 第三 章 结 果 ·········… … 14 3.1 免疫共 沉 淀和 免疫组化检测显示 小 鼠大脑组织 中ADAM 17 蛋 白在 神经迁 移 时期 有表 达 … … .‘… … 14 3.2 工SH 检 测 ADA M 17 在 小 鼠大脑 皮层 发 育 中的表 达 … … 巧 3. 2. 了探 胃 劣‘纷 汁 ，..… ，.… … ，… ，..… ， ·，·······，·····，一 万 及 2. 2 探 到劣‘分成 ..… ，… … ，，… ，，.，，.，... ···············而·… 24 3.3 ADAM 17 的干 扰质 粒 可 以有 效干 扰 其 蛋 白表达 。 … … 28 3.4 降低 ADAM 17 在大脑 皮层 发 育 时 的表达可 以影 响 中间神 经 前体 细 胞 的迁 移 。 29 3.5 受 到干 扰 影 响 的神 经细 胞种类 标 记… … 30 3.6 过 表达 ADAM1 7 后可 以部 分恢 复神 经 前体细 胞 的外 向迁 移 。… … 32 第 四章 结论 和讨 论 … … 33 参 考 文 献 .，… … _ … … 35 附录 … … 39 致谢 … … 牡 摘 要 高等动 物 的大 脑 皮 层 是 多层 结构 ，在 发 育过程 中神经 干 细 胞 的分化 和 外 向迁 移 对 于大脑 皮层 的多层 结构建 立有 着 重要 作用 。金 属 蛋 白酶 家族 的成 员 A D A 划 17 (A Di sinte颤 n An d M etall 叩rotease 17) 对 于在 上述 过程 中发挥重 要 作用 的多种 膜 蛋 白的功 能有着重要作用 ，包括 多个表皮生长 因子受体 的配体 以及 N otch 蛋 白等 。但 是 A D A M 17 在 大脑皮层 发 育过程 中，在 体 内实 际所起 到 的具体 的生理作用 ，目前还没有任 何报道 。 本 实验 首 先用 免疫沉 淀和 w estem blot 以及 免疫 荧光 的方 法检 测 了小 鼠大脑皮 层 发 育过程 中 A D A M 17 的蛋 白表达情况 ，看 到 A D A M 17 在神经 元外 向迁移 时期在皮质 版 和 中间 区有 一定表 达 。再 结合 了 R N A 干扰 和 子 宫 内 电转 的技 术 ， 降低 在 这 一特 定 时 间段 小 鼠大