转染野生型p53基因对人白血病细胞系生长的影响.pdfVIP

东 莞 理 工 学 院 学 报 第l5卷第3期 JOURNAL OF DONGGIJAN UNIⅦ RSITY OF TECHNOLOGY VO1．15 No．3 2008年6月 Jun． 2008 转染野生型p53基因对人白血病 细胞系生长的影响 刘经纬 (华东理工大学 生物工程系，上海 200237) 摘要：目的研究转染野生型p53基因对人白血病细胞的生长影响作用．方法将克隆有野生型p53基因 的pUHD10．3质粒，通过Lipofectin转染人白血病细~ U937、K562、HL60，用四甲基偶氮唑 (Mlvr)法 观察细胞的生长情况．结果转染野生型p53基因，可使人白血病细胞U937、K562、HL60的生长明显受到 抑制，第4天生长抑制率分别是28．6％、44．9％及49．0％．结论转染野生型p53基因能有效抑制人白血病细 胞U937、K562、HL60的生长． 关键词：克隆；有野生型p53基因：抑制；人白血病细胞 中图分类号：Q28 文献标识码：A 文章编号：l009—03l2(2008)03—0091—03 长时间以来，白血病的治疗一直以细胞毒化学药物为主，但细胞毒化学药物的治疗效果有限， 相当一部分病例在诱导缓解或巩固治疗中发生多药耐药，或者因为微小残留病灶由于无法清除而导 致复发，成为难治性白血病。大量研究结果表明，采用转基因疫苗、核酸疫苗治疗白血病能有更广 阔的应用前景” 。。许多资料表明，野生型p53基因 (wt．p53基因0不但能抑制肿瘤细胞增殖，而且能 有效的诱导肿瘤细胞凋亡H-7l。为了更全面地评价wt。p53基因对白血病细胞的作用，本实验分别观察 转染了wt—p53基因的三种人白血病细胞株 (U937、K562、HL60)生长情况，以探讨白血病的基因 治疗应用前景。 1 材料与方法 1．1 细胞株及培养条件 人白血病细胞U937、K562、HL60均用含抗生素和15％胎牛血清的RPMI 1640培养液 (Giboo)在37℃／5％CO2培养箱培养，取处于对数生长期的培养细胞用于实验。 1．2 p53基因及质粒 将克隆有野生型p53基因(、 p53基因)的cDNA质粒pUHD10．3．p53，将质粒转染感受态细菌E．coli DH5a菌株，用含筛选抗生素的LB培养基进行扩增。用碱裂解法提取该质粒，保存在含RNase A的 Tris—EDTA缓冲液 (TE．RNase)中备用。用限制性内切酶BamH I酶切后在琼脂糖凝胶中电泳，获得 一 1．8kb区带 (HIJp53基因)；将酶切获得的另一区带经过连接酶环化后，再转染感受态细胞E．coli DH5a菌株，进行扩增、提取收集质粒pUHD10．3，保存备用。 1．3 Lipofectin介导的基因转染 参见赖祥进的方法 l，将质粒DNA(质粒pUHD10．3．p53或空质粒pUHD10．3)与脂质体 Lipofectamine(购自GibcoBRL)按一定比例混合配成基因转染液。取对数生长期细胞，用PBS洗细 胞1次，离心后用无血清培养基将细胞密度调整为1×105个／mL，接种于96孔细胞培养板上，置37℃ ／5％CO2培养2 h。加入配制好的基因转染液后轻柔混合使分布均匀，再置37℃／5％CO：培养5 h。去除 含转染制剂的培养液，加入含15％胎牛血清的1640培养液培养待测。 收稿日期：2008—02—20 作者筒介：刘经纬(1987～)，男，湖北荆州人，生物工程专业在读大学生。 92 东 莞 理 3- 学 院 学 报 2008年 1．4 四甲基偶氮唑 (MTT)试验 在细胞培养板设定孔中分别加入含质粒pUHD10．3．p53或空质粒pUHD10．3的基因转染制剂，以 不加基因转染制剂的细胞孔作对照组，置37C／5％CO：培养5 h。去除含转染制剂的培养液，加入含 15％胎牛血清