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蛋白质提取的方法总汇 中国生命科学论坛 Ⅰ、植物组织蛋白质提取方法（summer） 1、根据样品重量（1g样品加入3.5ml提取液，可根据材料不同适当加入），准备提取液放在冰上。 2、把样品放在研钵中用液氮研磨，研磨后加入提取液中在冰上静置（3-4小时）。 3、用离心机离心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃ 4、提取上清夜，样品制备完成。 蛋白质提取液：300ml 1、1Mtris-HCl（PH8） 45ml 2、甘油（Glycerol）75ml 3、聚乙烯吡咯烷酮（Polyvinylpolypyrrordone）6g 这种方法针对SDS，垂直板电泳！ Ⅱ、三氯醋酸—丙酮沉淀法 1、在液氮中研磨叶片 2、加入样品体积3倍的提取液在-20℃的条件下过夜，然后离心（4℃8000rpm以上1小时）弃上清。 3、加入等体积的冰浴丙酮（含0.07%的β-巯基乙醇），摇匀后离心（4℃8000rpm以上1小时），然后真空干燥沉淀，备用。 4、上样前加入裂解液，室温放置30分钟，使蛋白充分溶于裂解液中，然后离心（15℃8000rpm以上1小时或更长时间以没有沉淀为标准），可临时保存在4℃待用。 5、用Brandford法定量蛋白，然后可分装放入-80℃备用。 药品： 提取液：含10%TCA和0.07%的β-巯基乙醇的丙酮 裂解液：2.7g尿素0.2gCHAPS溶于3ml灭菌的去离子水中（终体积为5ml），使用前再加入1M的DTT65ul/ml。 这种方法针对双向电泳，杂质少，离子浓度小的特点！当然单向电泳也同样适用，只是电泳的条带会减少！ Ⅲ、组织：肠黏膜 （newinbio） 目的：WESTERN BLOT检测凋亡相关蛋白的表达 应用TRIPURE提取蛋白质步骤： 1.含蛋白质上清液中加入异丙醇：（1.5ml每1mlTRIPURE用量） 2.倒转混匀，置室温10min 3.离心：12000 g，10min，4度，弃上清 4.加入0.3M盐酸胍/95％乙醇：（2ml每1mlTRIPURE用量） 5.振荡，置室温20min 6.离心： 7500g，5 min，4度，弃上清 7.重复0.3M盐酸胍/95％乙醇步2次 8.沉淀中加入100％乙醇 2ml 9.充分振荡混匀，置室温20 min 10.离心： 7500g，5min，4度，弃上清吹干沉淀 11.1％SDS溶解沉淀 12.离心：10000g，10min，4度 13.取上清-20度保存（或可直接用于WESTERN BLOT） 存在的问题：加入1％SDS后沉淀不溶解，还是很大的一块，4度离心后又多了白色沉定，SDS结晶？测浓度，含量才1mg/ml左右。 解决：提蛋白试剂盒，另外组织大小适中，要碎，立即加2X BUFFER，然后煮5－10分钟，效果很好的。 Ⅳ、lysis solution:（yog） Protein extraction buffer (Camiolo buffer): 100 ml= (0.075M Potassium Acetate) 0.736g (0.3M) NaCl 1.753g (0.1M) L-arginine basic salt 1.742g (0.01M) EDTA-HCl 0.292g (0.25%) Triton X-100 250. ul up to 100 ml with dH20. pH 7.4. Then 0.2 um filter. 1. Freeze tissue in liquid nitrogen. 2. Rinse in PBS then mince. 3. Add 1 ml Camiolo extraction buffer per 100 mg of tissue. 4. Homogenize for 1 minute at 4C. 5. Spin at 3,000. rpm/15 minutes/4C. 6. Remove supernatant and save in another tube. 7. If necessary, dialize the supernatant against PBS with 50mM/L Tris-HCl pH 7.4. Ⅴ、植物材料：水稻苗，叶鞘，根（ynibcas） 1、200毫克样品置于冰上磨碎 2、加lysis buffer，离心，10000rpm，4度，5min取上清 3、重复离心5min lysis buffer：urea np-40 ampholine 2-me pvp-40 Ⅵ、蛋白质样品制备（sigma） 秧苗蛋白质样品的提取按Davermal等（1986）的方法进行。 100mg材料剪碎后加入10mgPVP-40(聚乙烯吡咯烷酮)及少量石