微生物限度检测方法验证.docVIP

微生物限度验证 1.概述 1.1试验背景 为保证微生物限度检验结果的准确可靠，当建立产品的微生物限度检查法时，应进行方法的试验，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可以忽略不计，所采用的方法适合于该产品的微生物限度检查。按照《中国药典》2015年版要求，检验程序或产品发生变化可能影响检验结果时，检查方法应进行重新试验。 根据15年版药典及药品微生物实验室质量管理指导原则要求，检测环境由原来的为C级背景下局部A级空气单向流，变更为在C级背景下，生物安全柜中进行微生物限度检测, 试验用菌株 验证过程中严格按照经批准的方案规定的内容进行，若因特殊原因需要变更时，应填写方案变更申请及批准书（附件1），报验证领导小组批准。 2.试验目的及要求 按照《中国药典》2015年版规定对纯化水微生物限度检查方法进行试验，在现有检验程序、检测条件及培养条件下， 通过试验以确认所采用的方法适合于的测定根据样品特性制订检验方法和检验条件，按制定的方法进行试验，根据试验结果判断是否符合试验标准。 4.1风险等级标准 A、严重程度（S）：测定风险的潜在后果，主要针对可能危害产品质量、患者健康及数据完整性的影响，分为以下四级： 评分 严重程度 描述 4 关键 直接影响产品质量要素或工艺与质量数据的可靠性、完整性或可追踪性，可能导致产品不能使用 直接影响GMP原则，危害生产区活动 3 高 直接影响产品质量要素或工艺与质量数据的可靠性、完整性或可追踪性，可能导致产品召回或退回 未能符合一些GMP原则，可能引起检查或审计中产生偏差 2 中（不重要的） 对产品或数据无相关影响，但间接影响产品质量要素或工艺与质量数据的可靠性、完整性或可追踪性 可能造成资源的严重浪费或对企业形象产生较坏影响 1 低（可以忽略） 对产品或数据无相关影响，但对产品质量要素或工艺与质量数据的可靠性、完整性或可追踪性仍产生较小影响 B、可能性程度(P)：测定风险产生的可能性，为建立统一基线，建立以下四个等级： 评分 可能性 描述 4 极高 极易发生，约一星期一次或者更频繁 3 高 偶尔发生，约一个月一次 2 中 很少发生，约一年一次 1 低 发生可能性极低，三年甚至更长时间都不大可能发生 C、检测能力（D）:在潜在风险造成危害前，检测发现的可能性，设为以下四个等级： 评分 检测能力 描述 4 极低 失败很可能被忽视，因此没有检测到（无检测机制，无人工或视觉校验） 3 低 不检测，但可能被发现，如：作为现场检查的审计 2 中 定期检测，如：常规的手动控制或分析可检测到错误 1 高 始终检测到，如：自动控制装置到位，故障报警或错误后无法下一流程操作 4.2风险评估：根据确定的风险标准对已经识别并分析的风险进行评价，即通过评价风险的严重性和可能性从而确认风险的等级。 质量风险优先级别评价标准如下： RPN/严重程度 风险级别 风险处理优先等级 RPN＞16或S=4 高等风险 高优先 8≤RPN≤16 中等风险 优 先 RPN≤7 低等风险 忽 略 风险优先系数（RPN）计算：严重程度（S）×可能性程度(P)×检测能力（D）。 4.2.1风险识别 1) 产品组分或组成发生改变 2) 检验程序与检验条件发生改变 3) 产品存在抗菌活性，抗菌活性的去除影响微生物的生长 4) 微生物检验用物料影响检验结果 4.2.2风险分析及评价 4.3 依据风险分析及评价结果需实施的确认项目 5.试验前准备 5.1文件确认 序号 文件/资料 存放地点 1 2 3 4 5 5.2.仪器确认：· 5.2.1确认检测设备已经检定并在有效期内使用。 5.2.2确认检测设备运行良好，且满足检测需要。 设备名称 型号 编号 检定有效期至 运行检查 5.3培养基和冲洗液的确认 5.3.1确认培养基是否在有效期内使用 5.3.2确认培养基储存条件、性状符合要求。 品名（已配制培养基） 固体批号 厂家 配制日期 批号 有效期 胰酪大豆胨液体培养基 R2A琼脂培养基 0.1%蛋白胨水溶液 5.4试验用菌株及菌种要求 枯草芽孢杆菌 6.试验步骤 6.1.需氧菌计数 6.1.1.菌液制备 、枯草芽孢杆菌菌液制备：接种、枯草芽孢杆菌中，3～3培养18～24小时。取培养液1ml加0.9%无菌氯化钠溶液9ml/支），10倍稀释至1010-8，制成每1ml含菌数100cfu的菌悬液。 接种培养基 培养温度（℃） 培养时间 稀释液 稀释级别 计数(CFU/皿) 铜绿假单胞菌 胰酪大豆胨液体培养基