农业微生物学试验.PPT

培养基的制备和灭菌 1．本实验的目的和要求 了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解加压蒸汽灭菌的原理，并掌握其具体操作方法。 实验一 培养基的制备和灭菌 2．实验内容和原理 高氏一号培养基的配制? 手提式高压蒸汽灭菌锅的使用 生理盐水的配制 实验一 培养基的制备和灭菌 高氏一号培养基 高氏一号培养基是一种用来分离放线菌的选择性培养基。 高氏一号培养基配方如下： 葡萄糖 10g 　　蛋白胨 5g KH2PO4 1g 　　MgSO4·7H2O 0．5g 　　琼脂 15—20g 　　水 -1000ml 　　pH 自然 实验一 培养基的制备和灭菌 高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 实验一 培养基的制备和灭菌 需用的仪器和试剂等 可溶性淀粉、KNO3 、NaCl、K2HPO4、MgSO4 7H2O、FeSO4 7H2O、琼脂、试管、三角瓶、烧杯、量杯、天平、手提式高压蒸汽灭菌锅，牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸等。 实验一 培养基的制备和灭菌 4．实验步骤 培养基的配制 称量——?溶化——?调pH?——过 滤——分装——加塞——包扎——灭菌? —— 无菌检查? 高氏一号培养基的配制 1．称量和溶化 　按培养基配方，准确称取各成分，并将各成分依次溶化在少于所需要的水量中。待各成分完全溶化后，补足水分到所需体积。混匀后，加入琼脂加热溶化。 2．分装、加塞、包扎、灭菌，无菌检查。 灭菌操作步骤 1．首先将内层灭菌桶取出，再向外层锅内加入适量的水，使水面与三角搁架相平为宜。 2．放回灭菌桶，并装入待灭菌物品。注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。 3．加盖，并将盖上的排气软管插入内层灭菌桶的排气槽内。再以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓，使螺栓松紧一致，勿使漏气。 灭菌操作步骤 4．加热，并同时打开排气阀，使水沸腾以排除锅内的冷空气。待冷空气完全排尽后，关上排气阀，让锅内的温度随蒸汽压力增加而逐渐上升。当锅内压力升到所需压力时，控制热源，维持压力至所需时间。 本实验用 1．05kg/cm2，121．3℃，25分钟灭菌。 5．灭菌所需时间到后，切断电源，让灭菌锅内温度自然下降，当压力表的压力降至0时，打开排气阀，旋松螺栓，打开盖子，取出灭菌物品。 6．将取出的灭菌培养基放入 37℃温箱培养24小时，经检查若无杂菌生长，即可待用。 实验一 培养基的制备和灭菌 生理盐水的配制 0.85%的氯化钠水溶液 例如： 100ml生理盐水配制：称取0.85克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，定容到100毫升。 实验一 培养基的制备和灭菌 1. 制备培养基 高氏一号培养基 400ml/瓶，共4瓶 2.制备无菌生理盐水（供稀释平板计数用） 9ml/支 80支；225ml/瓶，8瓶（加玻璃珠） 3.灭菌 121℃ 25min 实验一 培养基的制备和灭菌 五、实验报告 1．结果 检查培养基灭菌是否彻底。 2．思考题 什么是选择培养基？它在微生物学工作中有何重要性？