植物microRNA的研究进展,河北农业大学学生.ppt

植物microRNA的研究进展 microRNA microRNAs(miRNAs)是一类内源非编码小RNA(sRNAs)。在植物中，由初级转录本(pri-miRNA)通过 型核糖核酸酶(DCL)加工。形成的长度约21～24ntRNAs。 miRNA组装的沉默复合体(RISc)，对互补mRNA(靶基因)可进行剪切、调控植物生长发育和胁迫应答等过程。生物体中sRNA种类繁多，miRNAs来自于基因组中特定序列(MIR)，除一些种系特异的miRNA家族外，开花植物中至少有20个保守的miRNA家族，每个家族在单基因组中有1—31个基因座。尽管植物miRNA的发现和识别时间短，但对miRNAs的研究已经成为国内外学者们解析基因表达调控过程的重要内容。 m iRNA的生物合成 合成步骤 ①MIR由RNA聚合酶Ⅱ(Pol一Ⅱ)转录成初级转录本(pri一miRNA)。 ②pri—miRNA被RNaseⅢ(Dicer—likel，DCLl)切割为前体miRNA(pre—miRNA)，形成miRNA双链复合物； ③再在HASTY蛋白(与动物蛋白Exportin一5同源)的协助下从细胞核运往细胞质，解旋后组装成RISC（沉默复合物），降解特定靶基因。 参与miRNA合成的蛋白包括已知的DCL、DRBP、AGO、HENl和新鉴定的HYLl、SE，以及其他未知功能蛋白。 miRNA及其靶基因的鉴定和验证 1、鉴定 miRNA的鉴定广义上包括筛选突变体、克隆测序、生物信息学预测、生物芯片(Micmarray)等途径。然而只有少量miRNA座是通过遗传筛选突变体得来，miRNA的鉴定最早是通过对细胞sRNA直接克隆和测序实现的。 随后，利用生物信息学方法(包括同源搜索、比较基因组预测、利用序列和结构特征分析等)预测不同物种基因组或EST序列库中存在的miRNA成为广泛应用的方法。近来，高通量深度测序技术的实现，为人们寻找更多新miRNAs提供了可能。另外，利用已知的miRNA种类，设计microarray也可实现高通量检测miRNAs，但目前技术仍然局限在对pre—miRNA的检测。鉴定miRNA靶基因的方法也主要是利用生物信息学方法预测基因组中与miRNA互补的序列 2、验证 生物信息学预测得来的miRNA及其时空表达特点需要传统试验方法验证，如Northern杂交、点杂交、原位杂交、RT—PCR、RNase保护试验、引物延伸分析和invader assay。 如利用商业化的LNA(锁定核苷酸)修饰的探针进行Northern杂交可以灵敏鉴定出miRNA；利用可溶性碳二甲胺固定探针的Northern杂交提高检测率旧；另外，近来涌现出很多新的研究方法和思路，如“降解组测序法”(Degradome sequencing)就是直接检测被剪切的miRNA靶基因，而不再依赖于预测和过表达的方法；病毒复制蛋白能够连接到miRNA／miRNA复合体上，使病毒侵染植物后miRNAs积累到最大程度。所以病毒侵染植株是克隆和鉴定新miRNAs的很好系统 miRNA的作用机理 为了清除发育中多余的mRNA，为下一步发育程序的执行奠定基础，miRNA指导的mRNA剪切意义类似于依赖泛素化的蛋白降解。不完全相同于其他sRNA的调控机制闭，miRNA的作用方式主要包括剪切和翻译抑制。 最近通过对miRNA途径缺失突变体拟南芥的研究，发现植物存在广泛的翻译抑制途径，类似于动物中细胞骨架动力学对 miRNA的作用，AGOI和AGOIO在微管协助酶katarin的作用下对植物翻译也有抑制作用。所以人们可以借鉴动物中miRNA的研究成果，从另一个角度认识植物中miRNA的调控机理。 miRNA的技术应用 一、植物 microRNA 对逆境胁迫应答的调节作用 科学家发现鞭毛素衍生肽能诱导拟南芥miRNA负调控F-box生长素受体TIR1、 AFB2 和AFB3 mRNA的表达, 从而阻遏生长素信号转导途径, 提高植物对Pseudomonas syringae等细菌性病害的易感性。并通过研究表明: miR399 通过调控靶基因泛素结合E2 酶的表达, 影响体内与Pi吸收和转运相关的蛋白质的稳定性, 从而调节植物体内Pi的平衡, 使植物免受低Pi和高Pi的胁迫。 1、抗 生物胁 迫 研究 发 现 ， 植 物 病 毒 对 植 物 的 侵 染 与 m iR N A