体外药物敏感试验ATP-TCA在肝癌化疗中应用.docVIP

体外药物敏感试验ATP-TCA在肝癌化疗中应用摘要：目的：探讨体外三磷酸腺苷生物荧光法化疗药物敏感试验(ATP-TCA)在肝癌化疗中的应用价值。方法：用ATP．TCA法检测6种化疗药物对37例肝细胞癌标本的敏感率和耐药率。结果：37例肝癌标本中，ATP-TAC的可评估率为89.19％，6种化疗药物的敏感率分别为：更生霉素(ACTD)84.85％；长春瑞滨(NVB)78.79％；丝裂霉素C(MMC)75.76％羟基喜树碱(HCT)42.42％；长春新碱(VCR)39.39％；吡柔比星(THP)36.36％。各试验药物的敏感率与肿瘤的大小、血清甲胎蛋白(AFP)无显著相关性(P0.05)，ACTD在P53蛋白阴性时敏感性较好，而ACTD、HCT、THP对I、I级肝癌的敏感率高于I、Ⅳ级。结论：ATP-TCA法在检测肝癌化疗药物敏感性时稳定可靠，可作为肝癌化疗药物筛选的方法之一。 关键词：肝细胞癌；化疗药物敏感试验；三磷酸腺苷生物荧光试验 中图分类号：R735．7 文献标识码：A 文章编号：1008－2409(2007)03－0430－03 传统化疗药物的长期使用使耐药现象越来越普遍，同一组织类型的肿瘤对同一药物的敏感性存在较大差异以及肿瘤多药耐药基因的普遍存在，这些因素都会影响肿瘤的化疗效果，肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)经验性联合化疗方案临床有效率低于30％。三磷酸腺苷生物荧光试验(ATP－base bioluminescence tumor chemosensitivity assay，ATP－TCA)是近几年发展起来的检测体外化疗药物敏感性的新方法，对恶性实体瘤有较高可评估率。本研究采用ATP－TCA检测临床上常用的化疗药物对肝癌组织的敏感性，为临床化疗方案的选择提供理论依据。 1　资料与方法 1．1一般资料 2004年1月至2005年3月广西医科大学第一附属医院肝胆外科手术切除的肝癌标本37例，其中男34例，女3例；平均46.4岁。全部病例均通过病理证实为肝细胞癌。其中伴有不同程度的肝硬化33例；HBsAg(+)35例，HBsAg(－)2例；AFP阳性23例(62.16％)，阴性14例(37.88％)；有门静脉癌栓10例；包膜完整9例；15例肿瘤直径小于5cm(40．54％)，22例直径大于5cm(59.46％)；病理分级：I级5例，I级17例，噩级10例，Ⅳ级5例。P53阳性19例，阴性18例。 1．2材料 ATP－TCA试剂盒：完全分析培养剂(CAM)、肿瘤组织解离酶、红细胞裂解液、最大ATP抑制剂、肿瘤细胞ATP提取液、荧光一荧光素酶、96孔无菌微孔培养板、注射器、过滤器等均为北京金紫晶公司的产品。MPL1自发光分析仪为德国BERTHOLD公司产品。 1．3方法 取新鲜肝癌组织约10g，切碎，用DNA酶、I型胶原酶等组成的混合酶分解癌组织，在37℃，5％CO2，95％湿度下孵育2～4h后，制成细胞悬液。倒置显微镜下，观察细胞的活性，进行细胞计数达到(1.5～2.5)×105个／mm3时备用。以CAM为溶剂将化疗药物配制成800％浓度备用，然后在96孔板上倍比稀释至6个梯度药物浓度：200％，100％，50％，25％，12.5％，6.25％，设置空白对照、ATP最大抑制对照，每孔各加入0.1ml细胞悬液，于5％C020.37℃，大于95％湿度下孵育6～7d，再加入ATP提取液0.1ml混匀后置室温下20～30min，取0.05ml混合液于检测板，加入荧光素一荧光素酶复合物0.05ml，发光分析仪检测。根据化疗药物系列浓度对培养肿瘤的细胞的不同抑制率，获得化疗药物的剂量－抑制曲线。从不同药物的剂量所对应的抑制率，取得化疗药物的剂量－抑制曲线下面积、抑制半数肿瘤生长时的药物浓度(IC50)、抑制90％肿瘤生长时的药物浓度(IC90)等参数，进而判断该肿瘤细胞对化疗药物的敏感度程度。 1．4敏感度分级 参考Kurbacher等人的标准[妇(TDC为测试药物溶度)。 强敏感：IC90≤100％TDC和IC50≤25％TDC。 部分敏感：IC90＞100％TDC和IC50≤25％TDC。 弱敏感：IC90≤100％TDC和IC50＞25％TDC。 耐药：IC90＞100％TDC和IC50＞25％TDC。 1．5统计学处理 SPSS11.0 for windows四格表确切概率法。 2　结　果 2．1 12种药物的敏感率 37例肝癌标本中有4例未培养出足够的活细胞数，未能继续进行试验。6种药物的敏感结果见表1，结果显示更生霉素的敏感率最高，丝裂霉素、长春瑞滨