北五味子配方颗粒中五味子甲素及乙素含量测定.docVIP

北五味子配方颗粒中五味子甲素及乙素含量测定摘 要：目的：北五味子配方颗粒中五味子甲素（DSSD）及五味子乙素（r-SSD）含量的HPLC方法学的建立及研究。方法：采用Hypersil C18（Φ 4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，流动相为甲醇-水（75：25），流速为1.0 mL/min，检测波长为254 nm。结果：北五味子配方颗粒中DSSD及r-SSD含量在既定的HPLC测定方法下，在0.265~1.590 μg 和0.638~3.188 μg范围内进样量与峰面积的线性关系良好（R=1.0000，R=0.9999），平均回收率为101.12%和100.38%，RSD（%）值为1.75和1.10。结论：所建立的HPLC测定方法准确、灵敏、重现性好，可用于北五味子颗粒中五味子配方颗粒甲素及乙素的质量控制。 关键词：北五味子配方颗粒；五味子甲素；五味子乙素；HPLC 中图分类号：R282 文献标识码：A 文章编号：1007-2349（2011）08-0067-03 中药配方颗粒又称免煎中药，单味中药浓缩颗粒是将单味中药饮片经过科学加工并提取中药材的有效成分，制成的中药饮片新剂型［1］。北五味子配方颗粒剂是以北五味子药材或饮片为原料，经水提取后加适量辅料，浓缩，喷雾干燥，干式制粒而制成的颗粒，临床要求其具有原药材相同的功效［2~4］，用于久咳虚喘，梦遗滑精，遗尿尿频，久泻不止，自汗，盗汗，津伤口渴，短气脉虚，内热消渴，心悸失眠等［5］。本实验依据中药传统汤剂的煎煮方法，建立北五味子颗粒中五味子甲素及乙素含量的HPLC检测方法，现报道如下。 1 仪器和材料 1.1 仪器 美国Agilent 1100 高效液相色谱仪，G1322A-Degasser真空脱气机，G1311A-QuatPump四元泵，G1313A-ALS自动进样器，G1311B-DAD检测器，Agilent Chemstation化学工作站。AND GR202电子分析天平（0.01mg，日本），CREST超声波清洗器（美国），旋转蒸发仪RE-52A（上海亚荣生化仪器厂），KDM型连续可调控温电热套（山东鄄城）。 1.2 试剂 娃哈哈纯净水（桂林娃哈哈饮用水有限公司），五味子甲素（批号110764-200405）、五味子乙素（批号110765-200205）由中国药品生物制品检定所提供。HPLC用甲醇为色谱纯，其他化学试剂均为分析纯。北五味子配方颗粒，自制。 2 实验方法及结果 2.1 色谱条件 色谱柱：Hypersil C18（Φ4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-水（75：25）；流速：1.0 mL/min；检测波长：254 nm；柱温：室温。理论板数按五味子甲素和五味子乙素不低于3000，分离度不低于1.5。 2.2 溶液的配剂 2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取取减压干燥至恒重的五味子甲素及五味子乙素对照品适量，分别加甲醇配制成0.100 mg/mL及0.125 mg/mL的溶液，即得。 2.2.2 供试品溶液的制备 取北五味子颗粒约1.0 g，精密称定，加氯仿3 mL，超声提取30 min，过滤，滤液置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，定容至5 mL量瓶中，作为供试品溶液。 2.3 测定方法 分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，按确定的色谱条件测定，五味子甲素及五味子乙素与其他成分分离良好，见图1~图3。 2.4 线性关系考察 精密称取五味子甲素对照品5.0 mg，加甲醇溶解，定容至20 mL，精密吸取1、2、3、4、5 mL，分别置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。精密称取五味子乙素对照品6.25 mg，加甲醇溶解，定容至20 mL，精密吸取1、2、3、4、5 mL，分别置10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。按上述色谱条件，分别进样10 μL，测定，以峰面积积分Y对五味子甲素及五味子乙素进样量C（μg）进行回归分析，结果五味子甲素得回归方程：Y=1969.96C-0.91，R=1.0000，表明五味子甲素在（0.265~1.590） μg进样范围内呈良好的线性关系。五味子乙素得回归方程为：Y=1925.39C-2.84，R=0.9999，表明五味子乙素在（0.638~3.188） μg进样范围内呈良好的线性关系。 2.5 仪器精密度考察 取五味子甲素对照品溶液（100.0 μg/mL）及五味子乙素对照品溶液（125.0 μg/mL），按上述色谱条件，依法操作测定，重复进样6次，测定色谱峰面积，计算RSD（%）值分别为0.149、0.472，说明仪器精密度很好。 2.6 稳定性试验